文档介绍：山东大学
博士学位论文
沙利度胺、5-氟脲嘧啶对胃癌细胞的作用及其机制的研究
姓名:李钧
申请学位级别:博士
专业:内科学(血液肿瘤)
指导教师:王欣
20080420
符号说明啶橙/溴化乙锭苏木素~伊红染色山东大学博士学位论文美国抗癌协会临床肿瘤协作中心激活蛋白三氧化二砷磷脂结合蛋白碱性成纤维细胞生长因子细胞抑制对照环氧合酶一一二氨基联苯胺乙烯雌酚脱氧前列腺素地塞米松卡苯达嗪二甲基亚枫细胞外基质酶联免疫吸附法流式细胞仪胎牛血清ǚ遴奏硫氰酸荧光素粒一巨核细胞集落生长因子免疫细胞化学染色法干扰素狿/一一一籉————籉!猰——
删姗四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法多发性骨髓瘤沙利度胺从ν山东大学博士学位论文白细胞介素一免疫调节药物大细胞癌骨髓增生异常综合症基质金属蛋白酶微血管密度非小细胞肺癌核转录因子过氧化物酶体增殖剂活化受体过氧化物酶体增殖剂反应元件磷脂酰丝氨酸增殖细胞核染色法碘化丙啶磷酸盐缓冲液维甲酸芴鳞癌辣根酶标记链霉卵白素试剂盒肿瘤坏死因子原位脱氧核苷酰介导的缺口末端标记技术血管内皮生长因子!猻!猘猀,!猙————
导师签名:卫日奎盟关于学位论文使用授权的声明原创性声明皿皿本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体,均己在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定,.同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅;本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、论文作者签名:缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。C苈畚脑诮饷芎笥ψ袷卮斯娑期:
沙利度胺、环遴奏ざ晕赴┫赴淖饔眉捌浠频难芯中文摘要王欣教授是目前治疗胃癌的主要手段之一,近年来虽然开发研制了不少抗肿瘤新药,但于细胞,减少化疗药物临床用药剂量,降低其副作用,一直是肿瘤药物治疗的研究山东大学博士学位论文博士研究生李钧专业内科学R翰博士生导师背景胃癌在我国的发病率和死亡率在各种恶性肿瘤中居首位,由于胃癌早期并无特异性表现,发现时大多数病人已处于中晚期。胃癌的治疗效果差强人意,化疗胃癌时有效的很少,环遴奏允俏赴┗频闹饕R┪镏弧A俅采常通过加大药物的剂量或多药物联合来增加敏感性,但由于胃癌对化疗药物大多为低敏感性,故虽然高剂量药物在一定程度上能提高疗效,然而剂量增大对证常组织绻撬琛⑿脑嗉案卧嗟的毒性也会增加,耐受性降低使疗效反而得不到提高,因而对胃癌患者的化疗中,适量联合使用其它类药物通过协同作用于肿瘤热点之一。沙利度胺唐访悍从ν作为早孕反应的治疗药物曾因引起胎儿肢体和内脏畸形而退市,但新的研究发现沙利度胺有抗血管生成和免疫调节及诱导凋亡作用,使该药物重新得到重视,并已用于炎症和肿瘤性疾病。现在对沙利度胺的作用机制仍所知甚少。本研究的目的是探讨沙利度胺单药、单药及沙利度胺和籉:嫌τ枚訫细胞株的抑制增殖、诱导凋亡的作用及对凋亡相关基因表达的影响。方法首先做出不同密度细胞的标准生长曲线,采用、、、、/不同密度的赴又肿装澹靠龈纯祝稳占尤嘌鹤魑DD饧右┛J技剖保∈倍蠱检测,选出观察时间内适宜的初始接种密度。根据第~步实验的结果,以后的实验组均采用/密度接种,次尤胧笛橛靡┛J
痬其中二甲基亚枫作为沙利度胺的溶剂,在培养体系中最大浓度为%个单药组,培养体系中药物浓度分别为、痬个联合用药组,培养体系中药物浓度分别为籉痬沙利度胺白对照组仅加入含%的培养液代替药物作用于细胞,另设不加细胞的试剂对照以排除各种试剂对觳獾挠跋欤髯榫个复孔。用药后采用活细胞倒置相差显微镜观察、染色法光学显微镜观察、丫啶橙/溴化乙锭染色荧光显微镜观察细胞的形态学变化,ā⒘魇较赴殖、诱导凋亡作用,免疫细胞化学法检测凋亡相关基因一过氧化物酶体增殖剂活表达的变化。细胞呈线性关系生长,均为本实验适宜的细胞初始接种密度,为细胞制悬时计算方便,最终选择/为实验用孔板的细胞初始接种密度。细胞初始接种密度为/时,细胞在∈蹦诔柿己玫南咝怨叵瞪ぃ捎靡猿な奔的研究。在倒置相差显微镜下,细胞数随沙利度胺、的浓度增加而减少,双药联合组细胞数减少更明显,上清液混浊,贴壁细胞欠透亮,可见凋亡细胞,其胞质固缩,体积明显缩小,整体呈圆形或不规则形,细胞核染色质浓缩及破碎;在光学显微镜下观察染色的爬片可见,实验组中的细胞因增殖受抑制而稀疏,可见凋亡细胞,其胞质固缩,体积明显缩小,整体呈圆形或不规则形,细胞核染色质浓染或形成染色质块,染色质块凝集在核的边缘呈半月形或相互分离形成多个核碎片,有的细胞膜起泡脱落形成凋亡小体;荧光显微镜下,