文档介绍：中国人民解放军军医进修学院;中国人民解放军总医院
博士学位论文
人胚胎干细胞诱导分化为胰岛素分泌细胞的研究
姓名:闫志风
申请学位级别:博士
专业:妇产科学
指导教师:李亚里
20080514
人胚胎干细胞定向诱导分化为胰岛素分泌细胞的研究中文摘要胰岛移植或赴娲翘悄虿∽罾硐氲闹瘟剖侄危赴丛囱现刎逊及免疫排斥反应限制了临床的广泛应用。将人胚胎干细胞,诱导为胰岛素分泌细胞,成为赴娲锏男伦试矗=决细胞来源匮乏带来了希望。已有多种方案由获得胰岛素分泌细胞,但均存在各种限制,目前仍缺乏将诱导分化为有功能的胰岛素分泌细胞的最佳方案。,并制定出有效而高效的分化方案,成为本课题的主要研究目的。第一,本研究摸索了在体外培养、扩增、冻存、复苏赴的条件,并对其特异性标志物进行了检测。结果显示,啻未ù仍然表达基因,免疫荧光法显示呈泪性,流式细胞术分析显示,粜韵赴壤直鸫ァィ喝色体核型分析表明为正常女性染色体核型琗。第二,∨嘌⑺腙旧ê笾种驳阶橹嘌笾校僖悦庖哂ü夥ḿ觳庖恍┫赴曛物的表达。结果显示,悬浮培养条件下,,呈‘性,培养液中能检测到一定量的胰岛素和浑模培养后还能检测到胰岛细胞标志物蚲及前体细胞标志物、.和的表达,。第三,模拟胰腺发育分化的生理过程,研究设计出五阶段诱导方案,具体如下:烦只种埔蛩厥筯形成拟胚体∨嘌;獷转移至明胶包被的组织培养皿后,加入含蚥的诱导培养基盏天,向定形内胚层诱导分化。.ḿ虵的基因表达,与同期自发分化斜冉希庖哂ü夥检坝表达。赴R坏呐嘌螅尤牒琤、、尼克酰胺的低血清诱导培养基作用蛞认偾疤细胞诱导。法和免疫荧光化学法分别检测前体细胞标志物及军医进修学院博士学位论文
粜裕琁检测到虶虮泶铮琑法检测到培表达。砑雍琁—⒛峥缩0贰—琹的低血清诱导培养基饔,促进胰岛细胞分化,法检测细胞胰岛素基因的表达,,撤除猯继续培养欤俳赴墒臁Sτ盟硫腙旧憾曰竦玫南赴沤腥旧ǎτ肦ḿ觳饬艘鹊核和胰高血糖素基因表达,应用ǚ直鸩舛嘶竦玫南赴排嘌荷锨搴胞浆中的胰岛素、浑暮浚⒂胩ザ鹊号嘁荷锨褰斜冉希蔡嘌岛素释放试验测定胰岛素与舴置谑欠癯势咸烟欠从π浴=,形成类球形诙锥斡盏己螅赴泶颯和颍冶泶锪扛哂谕谧苑⒎匕静槐泶锿馀卟惚曛物,随诱导时间延长,泶镏鸾ピ銮浚幻庖哂ü饣Хㄏ允荆诱导斓南赴顺蔛。谌锥蔚挠盏迹赴噬掀ぱ洌法检测到细胞表达、.微弱的基因,免疫荧光法显示细胞呈阳性。谒慕锥蔚挠盏迹渲幸徊糠窒赴奂啥嗖悖显示,不同诱导时期均有胰岛素基因的表达,且随诱导时间延长表达水平逐渐升高;免疫荧光显示,,。应用五阶段分化方案,芄挥行У姆只>哂胁糠諦细胞特性和糖反应性胰岛素分泌功能的细胞,为细胞替代治疗提供了有潜力的细胞来源和良好的临床应用前景。关键词:糖尿病,人胚胎干细胞,分化,胰岛素分泌细胞军医进修学院博士学位论文
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军医进修学院研究生学位论文原创性声明日期:蓿ホ獳研究生学位论文版权使用授权书同期:≯晁敬跞论文作者签名:勺志气同期:辥同论文作者签名:,习意气同期:矽酵籰秉承我院“敬业、勤奋、求实、创新”的学风,本人声明:所呈交的论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果,也不含为获得我院或其他教育机构的学位及证书而使用过的材料,对本文的研究作出贡献的个人或集体,均已在文中做了申请学位论文与资料若有不实之处,本人承担一切相关责任。本人保证毕业离院后,发表论文或使用论文工作成果时署名单位为军医进修学院或解放军总医院。学院有权保留并向国家有关部门或机构送交论文原件、复印件和电子版本,可以采用影印、缩印、扫描或其它手段保存论文以供被查阅和借阅。学院可以公布学位论文的全部或部分内容C苣谌莩指导教师签名明确的说明并表示谢意。指导教师签名:外
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