文档介绍：复旦大学
硕士学位论文
RT—PCR法检测前列腺癌患者外周血中PSMA的研究
姓名:侯剑刚
申请学位级别:硕士
专业:外科学
指导教师:丁强
20040428
复旦大学硕朴研究生毕业论文
法检测前列腺癌患者外周血中的研究
摘要
背景与目的
前列腺癌是美国男性最常见的恶性肿瘤,在男性癌症死亡率中位居第
二。在我国,随着诊疗技术的发展前列腺癌发病率、死亡率呈上升趋势。根
据调查认为在大于
岁的男性中因前列腺癌死亡的为,特别是大于岁的男性,其死亡率
明显增高。在确诊后约的病人在五年内死亡而的病人在十年内死亡。
早期前列腺癌临床症状不明显,约以上的病人在首次确诊时已发生转移,
而且其治疗效果不佳。尤其是对激素治疗不敏感的病人和晚期发生转移的病
人预后较差。目前预测局部进展期和转移性前列腺癌的主要手段是
经直肠超声,等,这些方法有一定的局限性。因此需要一种准确的
方法来判断,这样对于临床治疗也有帮助。
肿瘤的转移是一个多步骤的过程。而对于肿瘤的血行播散也研究了很长
时间了。以前主要是通过细胞学和免疫组织化学的方法来进行研究,但是这
些技术比较局限因为很难搜集到足够数量的循环中的肿瘤细胞。最新的研究
显示周围血循环中的肿瘤细胞是可以探测得到的,而且也有了一定的结果。
目前测定前列腺癌转移的主要手段还是同位素放射骨扫描,但是其影响因素
很多而且对于早期转移灶敏感性很低。近年来正电子发射扫描技术
在肿瘤的定位和转移的研究很热门也取得了不错的成绩。有人采用结合
来探测前列腺癌的转移灶,但现在还是有争论。而技术可以
探测到血中播散的肿瘤细胞。它主要是由于提高了敏感性而使这个技术更加
有效。在很多研究中运用技术来探测前列腺癌的微转移有很多好
处。
采用技术来测定某些前列腺特定的标志物如已经运用在对
各种组织淋巴结,骨髓,血清等来检测前列腺癌的转移。但是通过采用
技术来测外周血的来确诊前列腺癌的转移,其结果值得怀疑。
但是技术是目前检测微灶敏感性最高的方法,而且很多人在这方面
做了研究。
技术是一种能在外周血中检测基于某种特异细胞最敏感的
方法它能在”的细胞中检测到单个的基于某种特异的细胞。
有研究认为至少要有‘的循环肿瘤细胞才会导致微灶转移。而民,只有
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的循环癌细胞会产生单个转移灶。用技术来探测血循环中的细
胞取决于细胞的水平和许多技术问题,而技术问题是显而易见的。
随着前列腺特异膜抗原的发现及其核酸序列的测定,许多研究者认
为采用技术测外周血中的可以检测血循环中的前列腺癌细胞。
本课题研究的目的之一是探讨提取方法对实验结果的影响。另一个目
的是希望能得到一个敏感性比较高的能对前列腺癌的早期诊断和微转移灶
的期发现的方法,而不是建立在影像诊断的方法上。
第部分用试管和试剂盒抽提外周血总
从血液中提取总的一种快速高效方法
材料与方法
分别用传统的方法和试剂盒抽提例经穿刺证实为前列腺癌患者和用美国
基因公司的试管和试剂盒抽提例经穿刺证实为前列腺癌
患者外周血总
结果
传统方法得到的总电泳条带图像很模糊,经分光光度计测低。比值
约为
试管和试剂盒抽提外周血总电泳条带和
的图像非常好,。比值约为
二者存在明显差别。
结论
在应用技术中有很多影响因素,其中的抽提是关键。应用美国基
因公司的试管和试剂盒抽提外周血总是一种从外周血液
中提取总的一种快速高效方法。本方法操作技术简单,污染少,操作方便,
抽提的品质好,能为下一步实验提供了良好的基础。
第部分外周血中前列腺特异性膜抗原的表达研究
材料和方法
分别用美国基因公司的试管和试剂盒抽提例经穿刺证
实为前列腺癌患者、前列腺增生患者和健康人群的外周血总后,经过逆转录
反应形成后再进行聚合酶链反应得到的产物后进行分析
在外周血中的表达。并对引物和方法进行一些探讨。
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结果
巢式的效果较单引物好。
在正常人群、前列腺增生患者和前列腺癌患者中的阳性率之间有
显著差异
在前列腺癌患者中阳性率和前列腺癌转移有相关,差别有统计学
上的差异
在的前列腺癌和的患者中阳性率有显
著差异
在的前列腺癌患者中,骨扫描阳性和骨扫描阴性的
患者之间没有统计学上的差异
在的前列腺癌患者中,在骨扫描阳性和骨扫描阴性的
患者之间有统计学上的差异
结论
在应用技术中有很多影响因素,其中引物是较重要的一环,巢式
一的敏感性较高。
用方法检测血中,对鉴别与有意义。提示血清