文档介绍：无菌检验操作规程
目标
建立无菌检验标准操作规程，确保检验结果正确、可靠。
使用范围
本企业无菌产品无菌检验
职责
质量部QC
依据
《中国药典》通则1101
GB/T - （ISO11737-2:1998）
《疗器械灭菌微生物学方法第 2部分：确定灭菌过程无菌试验》
GB/T -
《医用输液、输血、注射器具检验方法第 2部分：生物学试验方法》
内容
无菌检验环境保障
无菌检査全部操作均需在严格控制微生物污染环境下进行，即无菌检査应在环境洁净度10000级下局部洁净度100级单向流空气区域内或隔离系统中进行。
操作环境无菌保障程度将直接影响无菌检验结果，为了确保无菌检验用洁净室（区）环境稳定性，确保检验结果可靠性，对洁净室（区）环境定时监测并采取合理方法确保洁净环境符合要求。
无菌检验全过程必需严格遵守无菌操作，预防微生物污染。
洁净区温度、湿度等参数必需符合对应洁净等级要求。
无菌检验操作还需要对检验环境进行监控，
培养基、稀释液、缓冲液
硫乙醇酸盐流体培养基，市售培养基干粉。除另有要求，接种后应置30~35℃培养。
胰酪大豆胨液体培养基，市售培养基干粉。接种后应置20~35℃培养。
中和或灭活用培养基，按上述硫乙醇酸盐流体培养基或胰酪大豆胨液体培养基处方及制法，在培养基灭菌或使用前加入适宜中和剂、灭活剂或表面活性剂，其用量同方法适用性试验。
胰酪大豆胨琼脂培养基，市售培养基干粉。
沙氏葡萄糖液体培养基，市售培养基干粉。
沙式葡萄糖琼脂培养基，市售培养基干粉。
，市售培养基干粉。
%无菌氯化钠溶液。
培养基使用性检验
无菌检査用硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基等应符培养基无菌性检査及灵敏度检査要求。本检验可在供试品无菌检査或和供试品无菌检査同时进行。
无菌性检验：每批培养基随机取5支（瓶），按各培养基要求温度下培养14天，应无菌生长。
灵敏度检验
菌种：培养基灵敏度检验所用菌株传代数不得超出5代(从菌种存中心取得干菌种第0代），并采取适宜菌种保藏技术进行保留，以证试验菌株生物学特征。
金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26 003]
铜绿假单胞菌[CMCC(B)10 104]
枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63 501]
生孢梭菌[CMCC(B)64 941]
白色念珠菌[CMCC(F)98 001]
黑曲霉[CMCC(F)98 003]
菌液制备：接种金色葡萄球菌、铜绿假胞菌、枯草芽孢杆菌培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，接种生孢梭菌培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30〜35℃培养18〜二十四小时；接种白色念珠菌培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基上，20〜25℃培养24〜48小时，-%无菌化钠溶液制成每lml菌数小于100cfu(菌落形成）菌悬液。接种黑曲霉培养物至沙氏葡萄糖琼脂面培养基上，20〜25℃培养5〜7天，加人3〜5 ml %(ml/ml) -%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采取适宜方法吸出孢子悬液至无菌试管内，% (ml/ml)-%无菌氯化钠溶液制成每lml孢子数量小于100cfu孢子悬液。菌悬液若在室温下放置，应在2小时内使用；若保留在2〜8 ℃在24h 内使用。黑曲霉孢子悬液存在2〜8℃，在验证过贮存期内用。
培养基接种：取每管装量为12ml硫乙醇酸盐流体培养基7支，分别接种小于100cfu色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌各2支，另1支不接种作为空白对照，培养3天；取每管装量为9ml胰酪大豆胨液体培养基7支，分别接种小于100cfu草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接种作为空白对照，培养5天。逐日观察结。
结果判定：空白管应无菌生长，加菌管生长良好，说明该培养基灵敏度符合要求。
方法试用性试验
进行产品无菌检验时，应进行方法适用性试验，以确定所采取方法适合于产品无菌检验。若检验程序或产品发生化可能影响检验结
果时，应重新进行方法适用性试验。方法适用性试验按“”要求及下列要求进行操作。对每一试验菌应逐一进行方法。
菌种及菌液制备：大肠埃希菌[CMCC(B)44 102]外，金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉菌株及菌液制同“5