文档介绍：山东大学实验报告
2017年 11月 13日
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科目：微生物学实验题目：放线菌的形态观察姓名：丁志康
一、目的要求
1. 学****并初步掌握观察放线菌形态的基本方法。
2. 初步了解放线菌的形态特征。
二、基本原理
放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性菌。常见放线菌大多能形成菌丝体，紧贴培养基表面或深入培养基内生长的基内菌丝（简称“基丝”），基丝生长到一定阶段还能像空气中生长出气生菌丝（简称 “气丝”），并进一步分化产生孢子丝及孢子。
有的放线菌只产生基丝而无气丝。在显微镜下直接观察时，气丝在上层、基丝在下层，气丝色暗，基丝较透明。孢子丝依种类的不同，有直、波曲、各种螺旋形或轮生。
在油镜下观察，放线菌的孢子有球形、椭圆、杆状或柱状。能否产生菌丝体及由菌丝体分化产生的各种形态特征是放线菌分类鉴定的重要依据。
为了观察放线菌的形态特征，人们设计了各种培养和观察方法，这些方法的主要目的是为了尽可能保持住放线菌自然生长状态下的形态特征。本试验介绍其中几种常用方法。
插片法：将放线菌接种在琼脂平板上，插上灭菌盖玻片后培养，使放线菌菌丝沿着培养基表面与盖玻片的交接处生长而附着在盖玻片上。观察时，轻轻取出盖玻片，置于载玻片上直接镜检。这种方法可观察到放线菌自然生长状态下的特征，而且便于观察不同生长期的形态。
玻璃纸法：玻璃纸是一种透明的半透膜，将灭菌的玻璃纸覆盖在琼脂平板表面，然后将放线菌接种于玻璃纸上，经培养，放线菌在玻璃纸上生长形成菌苔。观察时，揭下玻璃纸，固定在载玻片上直接镜检。这种方法既能保持放线菌的自然生长状态，也便于观察不同生长期的形态特征。
印片法：将要观察的放线菌的菌落或菌苔，先印在载玻片上，经染色后观察。这种方法主要用于观察孢子丝的形态、孢子的排列及其形状等。方法简便、但形态特征可能有所改变。
* 本次试验采用插片法）
三、器材
1、菌种：青色链霉菌，弗氏链霉菌。
2、培养基：高氏 I 号培养基。
3、仪器及其他用具：经灭菌的平皿、玻璃纸、盖玻片、玻璃涂棒，以及载玻片，接种环，接种铲，石碳酸复红染液，显微镜等。
四、操作步骤
倒平板：取融化并冷却至大约 50℃的高氏Ⅰ号琼脂约 20mL 倒平板，凝固待用
接种：用接种环挑取菌种斜面培养物（孢子）在琼脂平板上划线接种
插片：以无菌操作用镊子将灭菌的盖玻片以大约 45°角插入琼脂内（插在接种线上），插片数量可根据需要而定。
培养：将插片平板倒置， 28℃培养，培养时间根据观察的目的而定，通常 3~5d。
镜检：用镊子小心拔出盖玻片，擦去背面培养物，然后将有菌的一面朝上放在载玻片上，直接镜检。
* 观察时，宜用略暗光线；先用低倍镜找到适当视野，再换高倍镜观察；若要用油镜观察，需将有菌的一面朝下，并用胶纸将盖玻片固定在载玻片上再观察）
五、观察结果