文档介绍：第二军医大学
博士学位论文
抗CTLA-4抗体对脓毒症小鼠免疫功能及生存率影响的研究
姓名:薄禄龙
申请学位级别:博士
专业:麻醉学
指导教师:邓小明
2011-04
抗 CTLA-4 抗体对脓毒症小鼠克疫功能及生存率影响的研究
抗 CTLA-4 抗体对脓毒症小鼠免疫功能及生存率影响的研究

摘要
【目的】
细胞毒性 T 淋巴细胞相关抗原 4 (CTLA-4)是淋巴细胞活化与早期增殖的重要
抑制分子。CTLA-4 在脓毒症病理生理机制中可能发挥重要调节作用,是参与或介
导脓毒症免疫抑制的重要分子。本研究拟应用抗 CTLA-4 抗体治疗脓毒症小鼠,观
察其是否可改善脓毒症小鼠生存率,探讨抗 CTLA-4 抗体对脓毒症小鼠淋巴细胞凋
亡、细胞因子、脾脏淋巴细胞亚群的影响及其潜在机制。

【方法】
1. 将 62 只 CD1 小鼠随机分为假手术组(n=16)、盲肠结扎穿孔(CLP)术后 1
d(n=10)、4 d(n=16)、7 d(n=20)组,各组按相应时间点处死取脾脏,应用流式细胞仪
检测 CD4+ 、CD8+及调节性 T 细胞表面 CTLA-4 表达水平。
CLP、CLP+白念珠菌感染脓毒症小鼠模型。将 36 只 CLP 脓毒症 CD1
小鼠随机分为治疗组(n=18)与对照组(n=18),治疗组于术后、24 h 给予腹腔注射
50 μg 抗 CTLA-4 抗体,观察脓毒症小鼠 7 d 生存率;将 14 只 CD1 小鼠构建 CLP+
白念珠菌感染脓毒症模型,随机分为治疗组(n=7)与对照组(n=7)。治疗组于白念珠
菌感染后 2、5、7 d 给予腹腔注射 33 μg 抗 CTLA-4 抗体,观察小鼠 10 d 生存率。
54 只 CD1 小鼠随机分为假手术组(n=11)、假手术+抗 CTLA-4 抗体治疗组
(n=11)、CLP+PBS 对照组(n=16)、CLP+抗 CTLA-4 抗体治疗组(n=16)。抗 CTLA-4
抗体治疗组于术后 6 h、24 h 腹腔注射 50 μg 抗 CTLA-4 抗体,各组小鼠于术后 48 h
处死取脾脏。应用流式细胞仪检测 CD4+、CD8+ T 细胞 Caspase-3 表达,应用抗
-CD3/CD28 共刺激培养脾脏细胞后检测 TNF-α、IL-6、IL-10,IFN-γ表达。
28 只 CD1 小鼠随机分为假手术组(n=6)、假手术+抗 CTLA-4 抗体组(n=6)、
CLP+PBS 对照组(n=8)、CLP+抗 CTLA-4 抗体治疗组(n=8)。抗 CTLA-4 抗体治疗组
于术后 1、3、5 d 腹腔注射 50 μg 抗 CTLA-4 抗体。各组小鼠于术后 7 d 处死取脾脏,
应用流式细胞仪检测各组小鼠脾脏细胞总数、CD4+、CD8+ T 细胞数量,初始
(CD44low/CD62Lhigh) 、中央型记忆(CD44high/CD62Lhigh) 、效应型记忆
(CD44high/CD62Llow) 的 CD4+、CD8+ T 细胞数量。
【结果】
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第二军医大学博士学位论文
脓毒症小鼠术后 1、4、7 d 时 CTLA-4 阳性 CD4+ T 细胞比例以及术后 4 d、
7 d 时 CTLA-4 阳性 CD8+ T 细胞比例均显著高于假手术组(P 均小于 )。CLP 脓
毒症小鼠术后 1、7 d 时调节性 T 细胞表面 CTLA-4 表达均显著高于假手术组(46%,
25% vs. 18%, P<);同时,CTLA-4 表达的平均荧光强度也高于假手术组(11, vs.
5, P<)。
术后、24 h 分别腹腔给予 50 μg 抗 CTLA-4 抗体可显著提高脓毒症小
鼠 7 d 生存率(% vs. 5%,P<)。在 CLP+白念珠菌感染脓毒症模型中,对照
组小鼠于 CLP 术后 10 d 时全部死亡,抗 CTLA-4 抗体治疗组小鼠 10 d 生存率为 35%
(P<)。
CTLA-4 抗体可显著降低 CLP 脓毒症小鼠 Caspase-3 阳性 CD4+、CD8+ T 细
胞比例,抑制脾脏 T 细胞凋亡(P<)。抗 CTLA-4 抗体对脓毒症小鼠脾脏细胞分
泌 IL-6、TNF-α、 IL-10、IFN-γ水平影响不显著(P>)。
CTLA-4 抗体对 CLP 脓毒症小鼠脾脏初始(CD44low/CD62Lhigh)、中央型记忆
(CD44high/