文档介绍：血清中谷丙转氨酶的活力测定?【目的要求】? 1. 掌握血清谷丙转氨酶活性测定的基本原理。? 2. 熟悉血清谷丙转氨酶活性测定的具体操作方法。? 3. 了解血清谷丙转氨酶活性测定的临床意义。?原理–转氨作用:将α-氨基酸的氨基通过酶促作用转移到α-酮基上,生成相应的酮酸与氨基酸的反应。催化这一反应的酶称为转氨酶。–转氨酶广泛存在于机体的各种组织中。在肝、心、肾等组织中,谷丙转氨酶( GPT )和谷草转氨酶( GOT ) 的活性均较高。在正常的新陈代谢过程中,血清内两种酶维持一定水平的转氨酶活性(即正常值)。?谷丙转氨酶 glutamic-pyruvic transminase GPT ?谷草转氨酶 glutamic oxaloacetic transaminase GOT –当肝、心、肾等组织发生病变时,由于组织细胞肿胀、坏死导致大量的酶释放到血流中,从而引起血清谷丙转氨酶( GPT )、谷草转氨酶(GOT) 活性显著升高。因此测定这些酶的活性对某些疾病的临床诊断具有重要的参考价值。本试验用丙氨酸和α-酮戊二酸为底物(基质液成分) 经血清谷丙转氨酶作用生成谷氨酸?丙酮酸。丙酮酸??起??和显?作用的???二?基??发生?成??, 生成丙酮酸-???- 二?基??,?而??性??中生成???的??????物,???的????定????丙酮酸的生成量,??????活性的高?成????。?此?????的丙酮酸??液???,?????????????血清中???的活性。??????? 0 COOH C O CH 3 NO 2 H 2 N HN NO 2 COOH C CH 3 NO 2 N HN NO 2 +丙酮酸-2,4-二?基?????, 520nm ?具?????,????( OD 520值) ?丙酮酸?量成??,??此????测定。 2, 4-二硝基苯肼 COOH C NH 2 CH 3 COOH C O (CH 2) 2 COOH COOH C O CH 3 COOH C NH 2 (CH 2) 2 COOH + + 谷丙转氨酶 Ala Glu α-KG 丙酮酸 King 氏法谷丙转氨酶活性单位:每毫升血清在 37℃与的基质液作用 60分钟,生成 1umol 丙酮酸为一个活力单位。临床检验取血清量为 ,报告数据以 100ml 血清计算,因此实际侧得结果乘 1000 即可。?实验材料及试剂–实验材料:动物或人血清–实验试剂:丙酮酸标准液要求临用前配制; 四、实验操作标准曲线的绘制试??? 012345 丙酮酸??液, ml 基质液?液, ml ?酸??液, ml ?当于酶活力????? 0 28 57 97 150 200 2,4- 二?基?? 37 ℃???? 20min ???? ????? 10min ?????,于 520nm ?测??? GPT 活力测定:洁净干燥试管 2支, 即测定管、对照管各 1支试?测定?对??血清, ml 基质液?液, ml ---- 37℃?? 30min 2,4- 二?基???液, ml 血清, ml ____ 37℃?? 20min ?????液, ????? 10min ,对????,于 520nm ?测???