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MPEIs董黎徐冬梅洪军宫培军姚思德原发性肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一,近年来其发病率和死亡率有逐年升高的趋势。随着肿瘤放射物理学和生物学的发展,放射治疗已成为治疗肝癌的常用手段。常规放射治疗缺乏肿瘤靶向性,而肝脏是辐射敏感器官,难以耐受高剂量照射,肝硬化患者对射线的耐受性则更差。三维适形放射治疗对肝脏局部照射,减少了对正常肝脏组织的辐射1者,放射治疗仅有一定的姑息疗效。复发、转移等生物学特性,大多伴有肝硬化,对治疗耐受性差,目前实行的手术、放疗、化疗、中医中药治疗等的效果均不理想,因此需要探索新的治疗手段。种基因沉默技术,能快速、高效地抑制瘤细胞或组织中异常或突变蛋白的表达S胹特异性地抑制肿瘤发生和转移相关的基因表达,还可用来各种恶性肿瘤。但是目前仍然有一些关键问题阻碍其临床应用,合适的基因载体是其亟待解决的问题基因治疗研究中,易于制备且储存稳定性好,其分DNA受溶酶体降解,具有较高的转染率,是现能得到的最为有效的基因转导载体之一5玃存在一定111MPEIsshRNA的愿伟┫赴谙嘤Π谢騉的抑制作1研究所。转染试剂,购自法国公RNAcDNA海申能博彩生物公司。,在柱状PEI1721015MARLVEN型光相干光谱仪进行样品表征,合成详见专利Q∮昧>因肝癌初诊时多为晚期,且具有侵袭性强、易RNA(RNAinterference)提高化疗和放疗的效果,有望用这种新的手段治疗之一。(polyethyleniminePEI)材料HepG2公司。约梁泄鹤悦拦鶳公司。方法pH50FeCl2钴源中用丫射线辐照至kGyM-PEIslmolLHCIpH74基因转导研究。3l620086核技术泄蒲г荷虾Sτ梦锢硌芯克虾MPEIsRNA(shRNA)H拘始岸园谢虻谋泶镆种啤=,可以较高基因转染shRNAshRNAshRNAMPEIs因治疗载体。RNA中图分类号,.国家重点基础研究发展计划钅蜕虾J心擅鬃ㄏ资助第一作者:董黎,女,年出生,现为中国科学院上海应用物理研究所级博士研究生,无机化学专业通讯作者:姚思德收稿日期:,修回日期:琋
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久陀獳℃一掠我铮’)1Tap成此反应体系。从μ跫shRNAOPN3shRNA另外设计一条与所有人鼠基因序列均不同源的shRNAEcoil。嘌埂7直鹛舫龅ゾ摇床培养过夜。然后抽提质粒,并测序验证重组质粒序列的准确性。将所编码的直鸢邢騉不同序列的重组质粒分别命名为、、,阴性对照质粒命名表达载(GFP)荧光可以直接在荧光显微镜下判断转染效率。细胞转染细胞采用培养基常规培MPEIsDNA4胞的基因转染效果最佳,以下的转染均按这个比例HepG22470PBSInL12pg生理盐水。狿尤雜质粒后室温孵37C4hh察绿色荧光蛋白的表达,同时对单位面积内表达绿色荧光蛋白的细胞计数,计算表达绿色荧光蛋白的细胞占总细胞数的百分比。5軱接种于孔细胞培养板,℃、培养MPEIs1020}IgrnL(shNon)48后加入约,孵育后,取出孔细胞培养板在酶标仪AhTRlzolOPNS30minPCR1量,各取“方%SDS-PAGE120V2PVDF15BSA"Iris12000OPN稀释的昙嵌梗椅路跤hTBSTmin(ECL)actin为内参。128SPSS统计