文档介绍：课题来源:专名学位申请指导教称药理学蒙世芳师陈建海教授答辩委员会主席答辩委员会成员潘仕荣教授吴传斌教授陈晓峰教授论文评阅人洪岸教授全大萍教授陈燕忠教授自选人周长忍教授刘世霆教授基因枪介导的T靥宓幕蜃H境醪窖芯业年南方医科大学级硕士学位论文
基因枪介导的T靥宓幕蜃H初步研究荆/////////#/////////疘/硕士研究生:蒙世芳指导教师:陈建海教授摘要背景:随着近代生物技术的发展与人类基因库的不断完善,人们在理论上和实践上的不断探索,基因治疗对许多疾病提供了一个新的治疗途径。所谓基因治疗是指在基因水平上将有功能的基因或其他基因通过基因转移方式导入患者体内,并使之表达正常的基因,或表达患者原来不存在或表达很低的外源基因。基因治疗的基本条件包括:目的基因的获取,靶细胞的选择,将目的基因导入靶细胞的方法和途径。目前基因载体的主要分为两类:病毒载体或非病毒载体。非病毒载体具有的安全性,低免疫原性等优势成为研究的重点。其中如何将目的基因有效的转运到靶细胞或者靶部位是十分关键的步骤,基因枪作为纯物理方式的非病毒转染方法能够方便、有效的转运基因,已经越来越受到研究者的目的:┰龊吞崛≈柿蚿芯恳訢为粘合剂制备基因枪子弹的方法,初步探讨在同等条件下,用基因枪方法和普通转染方法在体外的转染能力比较,和用魑U澈霞梁陀么逞蔷ò纷魑U澈霞两刑逋庾H灸芰Φ谋冉希约用基因枪方法共转染同单独转染能否发挥协同作用,提高转染率的研究。方法:研究首先以平均分子量为钠暇厶亲魑7从ζ鹗嘉铮谑椅硕士学位论文关注。
过浣峁菇屑ǎ⒂萌趸炕撬岱测定其醛下经高碘酸钾氧化鲂∈保玫搅搜趸暇厶恰Mü嗡狒前贩ú舛搜趸葡聚糖醛基的含量,,,所得到的聚合物在过量硼氢化钠作用下,可还原生成稳定葡聚糖一精胺共价阳离子聚合物通基的含量。采用碱裂解法分别扩增和提取了具有红色荧光蛋白的质粒途有绿色荧光蛋白的质粒猚J紫冉柿转入到大肠杆菌中,增殖转化的大肠杆菌扩增质粒缓蟛捎眉盍呀夥ù哟蟪Ω司刑崛≈柿并采用质粒提取试剂盒除去其中的菌体残片及内毒素等进行了纯化。通过紫外分光光度计测量其浓度和纯度,并用琼脂糖凝胶电泳进行了鉴定。制备了基因枪子弹,以娲车难蔷ò纷鑫U澈霞林票富蚯棺拥以1ǜ婊颍浠魅橄侔┫赴,考察了基因枪转染技术对细胞的转染率和细胞的生存率的影响,并采用了星点设计一效应面法优化了试验的条件,通过荧光倒置显微镜观察细胞的转染情况并计算转染率;考察复合物细胞毒性,在同等条件下以亚精胺法制备了基因枪子弹作为对照。在此基础上,研究了以U澈霞林票傅幕蚯棺拥迪至肆街种柿—和甧墓沧H荆匝蔷ò贩ㄖ票噶嘶蚯构沧H咀拥魑对照。结果:所合成氧化葡聚糖醛基含量为/珼中接枝精胺的浓度为痬K崛〉闹柿的纯度戎翟../.,其浓度分别/,—.痬肈为载体,用化学方法转染质粒玫阶H韭饰%,/.,甧Ⅱ
替传统的亚精胺作为粘合剂,以质粒魑1ǜ婊颍票噶嘶蚯子弹,,优化了用基因枪法转染体外细胞转染条件。其优化条件为:每发子弹含钨粉的量为,。%,同通过模型预测值的偏差的绝对值为%,%。同时在同等条件下,用传统的亚精胺法制备了基因枪子弹作为对照,,在每发子弹含钨粉的量为,质粒的量为,基因枪的压力为浠骶嗬条件下,%,共同转染这两种质粒玫阶H韭饰%,同时,以同样方法下以亚精胺法制备了基因枪,在同等条件下转染细胞作为对照,%,共同转染这两种质粒玫阶H韭饰%。结论:该研究表明:用票傅幕蚯棺拥扔肈作为基因载体的化学方法体外细胞转染有一定的提高,比用传统的亚精胺法体外细胞转染也有一定的提高,并且用票傅墓沧H颈扔么车难蔷ò贩ㄖ票傅墓沧H咎逋细胞转染也有一定的提高。,能够很好的描述因素和效应之间的关系,方法确实可行。所合成的葡聚糖一精胺阳离子聚合物是一种制备工艺简单、低毒的高分子化合物,并可以代替亚精胺制备基因枪子弹。硕士学位论文关键词:;基因枪子弹;转染率
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