文档介绍：乙酰化修饰定量蛋白质组学
主要内容
乙酰化修饰韭标定量技术简介
乙酰化修饰韭标定量技术原理
乙酰化修饰非标定量技术优势
乙酰化修饰实验流程
°乙酰化修饰实验结果示例
乙酰化修饰实验详细步骤
一经典案例
酰化修饰非标定量技术简介
蛋白质的乙酰化修饰是在乙酰基转移酶的作用下,蛋白质的赖氨酸残基
上添加乙酰基的过程,是细胞控制基因表达、蛋白质的活性或生理过程的
中机制。
最近的调查表明,蛋白质的赖氨酸残基的乙酰化普遍存在于人体的代谢
酶之中,具有调节代谢通路及代谢酶的活性。乙酰化是一个普遍和重要的蛋
白质翻译后修饰,主要集中在对细胞染色体结构的影响以及对核内转录调控
因子的激活方面,还影响参与细胞周期和新陈代谢、肌动蛋白聚合控制,蛋
的乙酰化状态调节受损的癌症和多聚谷氨酰胺疾病。蛋白质的乙酰化具有
浪高的功能特异性,与肿瘤等等疾病密切相关,也是目前正在开发的抗癌药
物的靶点。通过高通量的蛋白质组研究和不同物种的代谢通路研究发现,在
生理状况下,存在着大量非细胞核的蛋白质被乙酰化修饰,具有广泛的生物
意义。
乙酰化修饰非标定量技术原理
技术原理
赖氨酸发生乙酰化的蛋白对各种生物功能进行调控。实验基于特异性识
別乙酰化赖氨酸残基的♂酰化抗体,对含有乙酰化修饰的赖氨酸肽段进行富集。
乙酰化之后的肽段,质量发生42Da的质量变化,基于非标定量的质谱方法对
乙酰化肽段进行鉴定
如:组蛋白乙酰化多发生在核心组蛋白N端碱性氨基酸集中区的特定
赖氨酸残基,将乙酰辅酶A的乙酰基转移到赖氨酸的sNH3+中和掉1个正电荷
蛋白乙酰化水平是由组蛋白乙酰基转移酶( histone acety l tmnsferse,HATs)
绿蛋白去乙酰基转移酶( histone deacety lase, HDACs)共同决定。在细胞核
组蛋白乙酰化与组蛋白去乙酰化过程处于动态平衡,精确地调控基因的转
表达
酰化修饰非标定量技术优势
乙酰化抗体:特异性识别乙酰化赖氨酸残基;精准锁定目标范围。
灵敏度高:可检测出低丰度蛋白
>分离能力强可分离出酸/碱性蛋白,小于10KD或大于200KD的蛋白、难溶性蛋白等
娇里:可以灯任何类型的蛋白质乙化进行定,包括膜白、蛋白和胞
停犟≌弃蛋售夯括制,特别适用于采用多种处理方式或来自多个处理时间的
輦墨店篮与定雷同步赶行,同时给出母一个组分的相对表达水平、分子量和
自动化程度高:液质联用,自动化操作,分析速度快,分离效果好。
乙酰化修饰实验流程
蛋白质样品制备
乙酰化抗体富集
软件分析
质语分析←
RP分解
定性定量蛋白质组学结果
统计学,生物信忠分析
乙酰化修饰实验流程
:收集不同组别的样本并分别提取蛋白质
2:蛋白质经过还原,封闭后用胰蛋白酶酶切
3:各组样本肽段进行纯化;
4:各组样本的肽段分别用乙酰化抗体试剂进行富集,并RP分离馏分;
5: Q-Exactive质谱检测,定性及定量分析;
6:流程化生物信息分析及个性化设计生物信息服务
乙酰化修饰实验结果示例
小鼠的肌肉样本:乙酰化修饰
质谱扫描完毕,得到质谱信号总图
实验(4例样本:A、B、C、D)
1:提取各组蛋白质,定量并
13用胰酶酶切;
,并用乙酰
化修饰抗体进行富集
4:不同样本中乙酰化修饰的
差异表达可通过二级质谱中峰
面积确定
图,结合数据库检索,得到蛋
横坐标是洗脱时间,纵坐标是信号强度
白的定性及定量信息。
乙酰化修饰实验结果示例
4例样本共鉴定到1449个蛋白,肽段6879个,乙酰化修饰肽段637个。乙
酰化修饰的差异分析如下
两两比较
显著差异
B/A
189
C/B
C/A
243
D/A
273
鉴定到的蛋白列表结果
1-(Cn5.
at1xE
定到的肽段列表结果
11:103cBC”的K8
Hg ALkVNGIOSVTEEC
514
P71
517E0607124E0
537747
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