文档介绍：中国医科大学
硕士学位论文
胃癌中DNA甲基化引起RASSF10表达沉默及临床意义的研究
姓名:李振化
申请学位级别:硕士
专业:临床医学;肿瘤学
指导教师:戴冬秋
201205
胃癌中谆餜泶锍聊傲俅惨庖的研究的材料与方法目一、细胞株和胃癌及对应的癌旁非癌组织二、实时定量三、甲基化特异性四,药物干预实验·中文论著摘要·肿瘤抑制基因的表达沉默在胃癌的发生发展中起重要作用,而谆肿瘤抑制基因表达沉默的主要原因之一。本文探讨胃癌中虻谋泶锼平及与启动子区谆墓叵担约癉甲基化的改变在临床中可能的应用价值。人正常胃粘膜上皮永生化细胞株个胃癌细胞株,,,琈,,胃癌组织和对应的癌旁非癌组织共对。上述窒赴昱嘌栈窈笠訲聿⒂寐确乱灰毂继崛,用コ齊中的缓笮惺凳倍縍觳釸的表达,用姆分析实时定量荩訥中的表达量为相对标准,其他鱿赴曛械表达量与其比较。扇【涞挠谢芗练ㄌ崛。缓笮兄匮橇蛩崮菩奘巍⒋炕⒒厥眨厥的眉谆匾煨砸锖头羌谆匾煨砸锓直鹦屑谆匾煨訮,对峁械缬痉治觯斜鹈恳桓鲅局蠷基因启动子区的谆状态,分非甲基化⒉糠旨谆、高甲基化肿刺2糠諱产物予以测序以判断确切的甲基化状态。
五、统计学分析结果结论关键词以去甲基化药物和/或组蛋白去乙酰化酶抑制剂对赴杲幸┪锔预,以不加任何一种药物的魑6哉兆椋渌τ萌魏我恢忠┪锏奈J笛组,完毕提取⑿惺凳倍縍狿检测谋泶铮晕抟┪锔稍さ亩照组为相对标准,其他实验组与其比较,用嫩ǚ治鍪凳倍縋数据。将癌组织和癌旁非癌组织中虻募谆刺型臣蒲Х治觯组织中虻募谆刺肫洳±⑹,有显著性差异;保尴灾圆钜臁在晡赴┫赴曛械谋泶锞碌鳎ゼ谆┪锖妥榈鞍兹ヒ酰化酶抑制剂均可诱导贛中的表达,二者联合时诱导作用更强。基因的启动子贕中为部分甲基化,而在晡赴┫赴株中均为高甲基化。基因的启动子在胃癌组织和相应的癌旁非癌组织中甲基化状态存在明显差异,前者甲基化频率明显高于后者%..ィ琾.。癌组织中虻募谆刺氚┰.⒋筇謇嘈%..ィ琾.⒘馨徒嶙R..%,、..┲幸蚱舳忧腄高甲基化和组蛋白去乙酰化引起表达沉默,其启动子区的谆刺胛赴┑牧俅膊±碇副暧泄兀銬高甲基化可作为胃癌恶性进展的一个指标。纳镅Чδ芸赡苌婕暗揭种莆赴的侵袭和转移,是胃癌中的候选肿瘤抑制基因。胃肿瘤;恢琢鲆种苹颍篋甲基化;表观遗传学.≥,..,..%..ィ琾..
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一、细胞系和胃癌啊旁组织泶锍聊傲俅惨庖的研究胃癌中谆餜材料和方法前古·论文·嗣青尽管胃癌的发病率和死亡率呈现下降趋势,但胃癌仍然是世界范围内癌症致死的第二位常见原因俊N赴┗颊叩揭皆壕驼锸保丫τ诮蛊冢庖彩目前胃癌的晟媛饰廾飨蕴岣叩脑蛑弧R虼耍赴┑脑缙谡锒虾驮缙谥疗成为提高胃癌患者长期存活的主要途径。近年来,肿瘤抑制基因甲基化引起的表达沉默成为胃癌病因研究中的热点,而相关基因的甲基化也有望成为胃癌早期诊断、预后的标志物和治疗的靶点。喙亟峁褂蚣易,在维持细胞正常生命活动中有着重要的作用圆,丫实在胃癌中频繁被高甲基化而表达沉默,并且这种因表遗传改变引起的表达沉默与胃癌的癌性转化和病情进展有密切关系嗍。近年来,蛟诎籽2甲状腺癌畸⑸窬褐柿鲟省⒍裥院谏亓龆中被发现频繁因甲基化而引起表达沉默,其呒谆爰鬃聪侔┖投裥院谏亓龅牧馨妥R泼芮邢喙兀⑶一故神经胶质瘤中与差的无进展生存期和综合生存率相关的一个独立的预后因素,提示募谆赡茉诙裥灾琢龅姆⑸⒄怪衅鹬匾W饔谩1疚闹荚谔教治癌中虻谋泶锼郊坝肫舳忧鳧甲基化的关系,以及谆的改变在临床中可能的应用价值。人正常胃粘膜上皮永生化细胞株和晡赴┫赴珺,琈,均购自中科院上海细胞所。对胃癌和对应的癌旁非癌组织来自于年轮月中国医科大学附属一院胃肠肿瘤外科经外科手术治疗胃癌患者的手术切除标本坷瓯揪谖以何赴┭芯克邢
鱎二,主要试剂∥陆三、主要仪器统病理学检查,患者术前均未行新辅助化疗,术前检查均无影像学可见的远处转移坷瓯静杉熬颊弑救送庥糜诒狙芯俊赛默飞世尔生物化学制品北京有限公司胎牛血清蛋白酶中国碧云天生物技术研究所美国公司美国加拿大日本公司酆厦氢醌亚硫酸氢钠拦鶶公司美国甲基化酶美国佘誏一甲硫氨酸去傅乃中国杭州博日科技有限公司超纯水细胞培养瓶香港生物科技有限公司嘌日本微量加液枪法国公司光学倒置显微镜
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