文档介绍：南方医科大学
博士学位论文
胸腺基质淋巴细胞生成素在呼吸道合胞病毒感染诱发哮喘加重
中的作用研究
姓名:夏虎
申请学位级别:博士
专业:呼吸内科学
指导教师:蔡绍曦
20090525
胸腺基质淋巴细胞生成素在呼吸道合胞病毒感染诱发哮喘加重中的作用研究博士研究生:夏虎指导教师:蔡绍曦教授摘要气道慢性炎症、粘液分泌增加、气道反应性增高及气道重塑为主要特征。哮喘微生物感染对机体的破坏作用导致宿主防御机制的进化。在哺乳动物,有两套防御机制:固有免疫和继发性免疫。固有免疫识别是通过模式识别受体琍来完成的,每个受体都对微生物的保守和不变的特征识别具有广泛的特殊性。识别微生物是通过与病原体相成的。在的病毒识别中,最具特征性的是样受体博士学位论文研究背景及意义:支气管哮喘虺葡是一种严重危害人类健康的慢性呼吸道疾病,以的发生与发展受多种因素的调控,从而决定了淋巴细胞分化,免疫反应类型,细胞因子合成及组织修复过程。尽管哮喘基础研究取得较大的进步,但目前临床上对于哮喘的急性加重以及重症哮喘的治疗仍然不是很满意。随着分子病毒学技术的发展和—际踉诹俅惭芯恐械挠τ茫粑啦《靖腥咀魑O重的最重要原因已被广泛认识。已经证实,病毒诱发的哮喘加重在学龄儿童中的比例约为%ィ诔扇酥性嘉%。呼吸道合胞病毒琑魑:粑赖チ碦病毒的一种,是引起小儿呼吸道感染的最常见病原体,也是诱发婴幼儿哮喘的主要原因,在哮喘的发展和加重中被认为是一个重要的危险因子。而且,针对拿庖呤遣煌耆ǖ暮驮菔钡模以已经感染过某扇丝梢栽俅伪煌甑腞感染。关分子模式猘,的结合来完
免疫反应产生细胞因子,从而影响继发性免疫反应。在针对吸入性外来变应原的局部分化。研究证实能诱导鹘诔跏糃淋巴细胞向赴只激因子的研究中发现,的配体双链与受体结合产生大量症。这个推论可以解释为什么呼吸道病毒感染加重变态反应性炎症,而从免疫学理论上讲,病毒诱导的庖叻从δ苻卓筎调节的炎症反应。应受体的表达情况及对生成的影响,通过抗体阻断的方法研究虸鄄炱涠訰感染诱发的生成影响,同时观察利巴韦林和地塞米松等药物干预对支气管上皮细胞生成的影响。为明确在哮喘动物感染情况下小鼠气道局部的表达与小鼠肺部炎症的相互关系,并观察不同篊匀酥苌分别加入含/、簦痬眵/、“痬豨/、烬中文摘要呼吸道上皮细胞除了作为物理屏障,也能通过感受外界刺激因素启动固有和病原体的继发性免疫反应的起始中,局部浸润的树突状细胞起到关键性作用。气道上皮细胞影响梢酝ü鼶激活因子胸腺基质淋巴细胞生成素琓的产生来调控细胞产生、、蚑—认赴蜃印T诙云郎掀は赴蒚拇的。这提示病毒在呼吸道上皮细胞内复制过程中形成的屑涮澹可能通过的诱导,加重字⒎从Γ佣徊郊又叵颊咂勒衬ぱ本项研究主要通过研究腥救酥苌掀は赴分析固有免疫反是否可以引起的生成的改变,通过模拟气道局部蚑内环境加入体内的变化与哮喘的关系,通过腥拘∈笙又啬P徒徊椒治鲈赗药物治疗对腥鞠又匦∈笃繲珊头尾垦字⒌挠跋臁方法:一、体外细胞学试验煌ǘ群筒煌奔淙斯ず铣蒬聚肌胞皮细胞表达和的影响
/聚肌胞的培养基培养赴碳小时,实时荧光定量相对表达量。甊病毒感染对人支气管上皮细胞逃忻庖呤芴錞泶锏挠跋ú馑鉘细胞毒力。腥救酥苌掀は甊病毒感染及干预因素对赴鸗组,厝姿勺椋籖感染焙笫凳庇ü舛縍觳庀赴鸗臀ち忠《靖腥径细胞检测各组细胞蛋白表达水平。甊病毒感染对哮喘加重小鼠气道分泌和肺部炎症的影响疪模型组无创肺功能检测小鼠气道反应性:不同浓度乙酰甲胆碱激发,薮捶功能检测仪检测值。博士学位论文检测和肛痬奂“尤嘌嘌细胞,分别刺激凳庇ü舛縍觳釺相对表达量。《靖腥綡术一赴胁《纠┰觯籖在赴誓诶┰龅募浣免疫荧光鉴定;胞小时,间接免疫荧光检测细胞受体表达变化。泶锼和蛋白表达的影响试验分椋憾哉兆椋琑组,痎组,疘组,疘和相对表达量;腥J焙體检测各组细胞蛋白表达水平。表达水平和蛋白表达的影响试验分椋憾哉兆椋琑组,臀ち肿椋臀ち肿椋籖感染时后实时荧光定量检测细胞相对表达量;腥焙二、动物实验只/∈蠓治组:对照组珺组组珻组组
小鼠气管灌洗液细胞分类计数和觳釺壕垡蚁┑脊苄行∈笃懿管,嘞矗嘞匆荷锨錏法检测细胞因子;灌洗液离心沉淀细胞计小鼠肺脏组织病理观察:苏木素一伊红染色观察小鼠肺脏病理变化;碘酸雪夫旧ü±表示。各组间多重比较采用单向方差分析,方差齐性时采用ê一、体外细胞学试验结果表达水平增高。中文摘要小鼠血清ḿ觳庀赴蜃樱盒∈笱G逵糜贗、猋、、细胞因子检测。数,瑞氏一吉姆萨染色细胞分类计数。小鼠肺脏组织免疫组化观察气道上皮细胞表达,陨ǎ粜韵允棕黄色。小鼠肺脏组织蛋白觳猓珿—软件分析的相对表达量。煌┪镏瘟贫訰感染哮喘加重小鼠分泌和肺部炎症的作用只/、鼠分为椋憾哉兆疪组奂“疪/篊组臀ち肿疪/,地塞米松组/疍组无创肺功能检测小鼠气道反