文档介绍：华中科技大学
博士学位论文
14-3-3gamma对神经元缺氧缺血损伤的保护作用及机制研究
姓名:叶仕桥
申请学位级别:博士
专业:病理学与病理生理学
指导教师:陈晓钎
20090501
华中科技大学博士学位论文
14-3-3gamma对神经元缺氧缺血损伤的保护作用及机制研究

博士研究生:叶仕桥
导师:陈晓钎教授
华中科技大学同济医学院基础医学院病理生理学系
中文摘要
14-3-3 蛋白是 1967 年从牛脑中分离出,有 7 个亚型,它高度保守,广泛存在于
真核生物中。其中 beta, epsilon, eta, gamma, zeta 在脑组织中含量十分丰富。
14-3-3gamma 主要在神经元表达。我们曾报道 14-3-3gamma 在体外缺血培养的星形胶
质细胞中表达上调,并且通过结合磷酸化 Bad 减少缺血诱导的胶质细胞死亡。但是,
14-3-3 蛋白在神经元中保护机制至今尚不清楚。[目的]研究 14-3-3 蛋白在缺血损伤的
神经元中的表达,保护作用和机制。[方法]通过基因重组技术构建 14-3-3gamma 干扰
质粒,运用 LDH 释放实验,Western blot,免疫荧光染色,免疫共沉淀以及原代神经
元核转染等方法测定 14-3-3gamma 的表达,保护作用及机制研究,采用 CoCl2 诱导的
缺氧预适应方法研究在体 14-3-3 蛋白的保护作用。[结果]我们发现原代培养的小鼠大
脑皮层神经元缺血处理后 14-3-3gamma 表达明显增加。而 14-3-3beta,epsilon,eta 和
zeta 在相同处理下没有明显的变化。过度表达 14-3-3 特异结合蛋白(Diforpein)导致
小鼠神经瘤母细胞(N2a)和原代神经元死亡增加。而过度表达 14-3-3gamma 显著减
少缺血诱导的 N2a 和原代神经元的死亡。除此之外,我们在培养的 N2a 细胞和原代神
经元中加入特异降解 14-3-3gamma 的 siRNA 也增加缺血诱导的细胞死亡。为了明确
14-3-3gamma 在缺血性损伤中的保护机制,通过免疫共沉淀方法,我们发现在原代培
养的小鼠大脑皮层神经元经缺血处理后,14-3-3gamma 上调并特异结合同时上调的丝
氨酸 37 位点磷酸化 beta-catenin,而它与 Ask-1 没有明显的相互作用。另外,我们还
发现在过度表达 14-3-3gamma 的 N2a 细胞中,Bax 的表达明显下调;而过度表达
14-3-3gamma-siRNA 至内源性 14-3-3gamma 下调时,Bax 的表达增加。在氯化钴诱导
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的缺氧预适应动物模型中,动物耐受缺氧存活时间明显延长,14-3-3gamma 的表达上
调,而其它 14-3-3 亚型发生不同的变化,Bax 和 p53 的表达没有明显影响。[结论]上
述结果表明,在缺血神经元 14-3-3gamma 表达上调并结合磷酸化 beta-catenin,降低
Bax 的表达发挥减轻缺血神经元损伤的重要内源性保护机制,缺氧预适应导致内源性
14-3-3gamma 上调增加动物耐受缺氧。
关键词:14-3-3gamma,Bax,beta-catenin,缺血,神经元,保护,缺血预适应

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Protective function and mechanisms of 14-3-3gamma on ischemic neurons

. D. Candidate : Shiqiao Ye
Supervisor : Prof. Xiao Qian Chen
Department of Pathophysiology, Tongji Medical College,
Huazhong University of Science and Technology
Abstract
14-3-3 proteins are abundant in brain tissues and the gamma isoform is mainly
expressed in neurons. We have previously reported that 14-3-3gamma could be
up-regulated in astrocytes by in vitro ischemia and attenuated ischemia-induced astrocyti