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金黄色葡萄球菌诱导牛乳腺上皮细胞凋亡及其信号通路的研究摘要金黄色葡萄球菌腥驹斐沙中阅膛H榉垦椎姆⒉机制复杂,目前仍未彻底阐明。牛乳腺上皮细胞是病原菌穿越乳导管进入牛乳腺后首先接触的细胞,其与病原微生物的相互作用对于疾病的发展进程和转归有非常重要的意义。许多病原微生物能够诱导宿主细胞凋亡,并以此影响疾病的发生发展进程。金黄色葡萄球菌可以诱导单核细胞及内皮细胞等多种细胞发生凋亡,从而逃避免疫监视,加重机体感染。金黄色葡萄球菌感染造成奶牛持续性乳房炎是否与其诱导牛乳腺上皮细胞凋亡有关,目前未见相关报道。本研究以杲鸹粕咸亚蚓腥九H橄偕掀は赴DP停鄄觳煌鸹粕葡萄球菌诱导牛乳腺上皮细胞凋亡情况,检测金黄色葡萄球菌毒力因子与其诱导牛乳腺细胞凋亡的相关性,并在此基础上,探索金黄色葡萄球菌诱导牛乳腺上皮细胞凋亡的信号传导机制,以期为金黄色葡萄球菌持续性牛乳房炎发病机理解析、抗细菌药物设计和疫苗研制提供理论依据。首先,采用乳汁分离法和胶原酶消化法分离培养牛乳腺上皮细胞,并通过细胞免疫荧光染色法、及核型分析鉴定牛乳腺上皮细胞;其次,用金黄色葡萄球菌侵染牛乳腺上皮细胞,采用普通光镜、扫描和透射电子显微镜、细胞核染色法观察金黄色葡萄球菌诱导牛乳腺上皮细胞凋亡的形态学变化,并通内蒙古大学硕士学位论文
的表达情况,死亡配体及痑的表达情况,.及过流式细胞术疨痉定量检测金黄色葡萄球菌感染对牛乳腺上皮细胞凋亡的诱导作用;再次,通过对试验所用杲鸹粕咸亚蚓目挂┬浴⑸长特性、溶血性、粘附和侵袭性能进行检测,探索其与牛乳腺上皮细胞凋亡的相关性;最后,通过觳飧腥厩昂笙赴蛲鱿喙氐癱/的活性变化,并用觳飧腥厩昂笈H橄偕掀は赴劳鍪芴錐及其下游的表达情况,探讨金黄色葡萄球菌诱导牛乳腺上皮细胞凋亡的信号传导机制。得出如下结果:建立了从牛乳汁及乳腺组织中分离培养牛乳腺上皮细胞的方法。乳汁分离法相对组织培养法而言,取材便捷并可有效缩减成本,亦可获得纯净的牛乳腺上皮细胞;证明金黄色葡萄球菌可以诱导牛乳腺上皮细胞发生凋亡;证明金黄色葡萄球菌对牛乳腺上皮细胞的凋亡诱导能力与菌株的个体差异有关,其溶血性与侵染性可能与牛乳腺上皮细胞凋亡有一定的相关性;初步证明金黄色葡萄球菌可能通过瓼甤甤凋亡传导途径诱导牛乳腺上皮细胞发生凋亡,。为解释金黄色葡萄球菌持续性牛乳房炎的发病机制提供了有益的试验依据。关键词:牛乳腺上皮细胞;金黄色葡萄球菌;持续性牛乳房炎;细胞凋亡信号通路
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文糕述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯目录第一章牛乳腺上皮细胞的分离培养及鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.第二章金黄色葡萄球曹对牛乳腺上皮细胞的凋亡诱导作用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯...涸赶ㄅ嘌H橄偕掀は赴乳汁分离法培养牛乳腺上皮细胞⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.H橄偕掀は赴拇ù⒍、复砑胺醋B汲蒫ú舛ㄅH橄偕掀は赴で摺检测角蛋白皃酪蛋白⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯...赴庖哂ü馊旧ǚḿń堑鞍⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..旧逯衅