文档介绍：分类号: 密级:公开
学号:2009108015 单位代码:10759
石河子大学
硕士学位论文
棉酚诱导新疆细毛羊肾小管上皮细胞凋亡
及其机制的研究
学位申请人潘奇
指导教师潘晓亮教授
申请学位门类级别农学硕士
学科、专业名称动物营养与饲料科学
研究方向动物营养与环境调控
所在学院动物科技学院
中国〃新疆〃石河子
2012 年 6 月
Effect of Gossypol on Induction Apoptosis in Renal Tubular Epithelial
Cells of Xinjiang fine-wool Sheep and Its Mechanisms
A Dissertation Submitted to
Shihezi University
In Partial Fulfillment of the Requirements
for the Degree of
Master of Agriculture
By
Pan Qi
(Animal Nutrition and Feed Science)
Dissertation Supervisor: Prof. Pan Xiao-liang
June, 2012
石河子大学学位论文独创性声明及使用授权声明
学位论文独创性声明
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研究生签名: 时间: 年月日
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研究生签名: 时间: 年月日
导师签名: 时间: 年月日
摘要
目的:在新疆饲喂日粮添加有棉粕的绵羊频发尿结石病,并伴随着肾脏的病变,相关试验已证
明,棉粕中毒性成分游离棉酚对肾脏有损害作用,本试验通过左旋棉酚作用体外培养的细毛羊肾小
管上皮细胞,研究左旋棉酚对肾小管上皮细胞的影响和作用机制,进一步探讨尿结石发病的分子作
用机理,为防控尿结石症提供理论依据。
方法:试验一:;
法,相差消化法和差速贴壁法,分离纯化培养肾小管上皮细胞;,细胞免疫组化鉴
定;,观察复苏后细胞生长状态。
试验二: MTT 法检测不同浓度左旋棉酚在不同时间对培养肾小管上皮细胞的增殖作用;2.
通过抽提棉酚作用细胞后的 DNA,进行凝胶电泳,检测 DNA Ladder,判断细胞是否发生凋亡;3.
利用免疫组化 SP 法,检测左旋棉酚作用培养细胞后,对细胞凋亡关键蛋白 Caspase-3 表达的影响;
DNA 含量,软件分析细胞周期分布。
结果:试验一:,细胞贴壁早,生长快,处理时间短,减少了污染
机率,提高了细胞培养效率;,纯度达 90%以上,细胞呈多角形,鹅卵
石状,折光性强,连接紧密,可传至第 9 代; CK18 的染色组,免疫细胞
化学染色鉴定为阳性,阴性对照染色组,细胞无明显染色;,细胞生长状态较差,
无法进行传代培养。
试验二: 24h、48h 和 72h 后,MTT 法检测出不同浓度的左
旋棉酚均表现出抑制细胞增殖作用(P<),随着浓度的增加,抑制作用增强,呈一定程度的浓
度梯度性。其中 24h 处理后,128mg/L 及更高浓度的左旋棉酚对细胞有明显的抑增殖作用,48h 和
72h 处理后,2mg/L 及更高浓度的左旋棉酚对培养细胞也呈显著的抑增殖作用。这种抑制增殖作用,
在时间上也呈现出一定程度的梯度,差异显著,随着时间的增加,棉酚的抑增殖作用越强,细胞凋
亡率增加,作用 48h 和 72h 的半数抑制浓度分别为 /