文档介绍：新疆农业大学
硕士学位论文
转Bt基因抗虫棉抗性鉴定及遗传规律研究
姓名:霍雨猛
申请学位级别:硕士
专业:动物学
指导教师:王登元;胡保民
20040501
摘要
本文对通过花粉管导入法导入抗虫基因 Cry1Aa 的受体材料 7030 转化植株 k3
k6 k7 k19 进行了 PCR 检测生物测定卡那霉素检测鉴定出了 k6 k19 为转基
因抗虫棉我们用 SDS 法提取到了高质量的 DNA 进行了 PCR 检测在 PCR 检测中
我们确立了最佳反应体系反应总体积为 20ul 其中含 10 反应缓冲液 2uL 氯化镁为
酶为 dNTPs Primer1 为 Primer2 为
模板 DNA 为稀释 3000 溶液并且深入研究了 PCR 反应中氯化镁对 PCR 反应的影响
氯化镁的浓度受到了多方面因素的制约在低浓度氯化镁的情况下 Mg2+首先被
EDTA 等络合剂络合一部分然后与模板引物 dNTP 结合一部分剩余的 Mg2+与
TaqDNA 聚合酶结合起催化活性但是当酶浓度增加时没有与 Mg2+结合的酶也可以在
引物和模板进行退火时与他们结合但是这种结合不具有催化活性因而无活性的酶对
有活性的酶产生了竞争作用导致 PCR 产率降低高浓度时非特异性扩增增加研究
了抗虫基因导入受体植株后酯酶同工酶酶谱过氧化物同工酶酶谱以及过氧化物同工
酶活性均发生了较大变化
本文还用卡那霉素检测法对转化植株 K6 K19 的遗传规律以及与我国主要的 3
类抗虫棉山西 94-24 中心 94 和 R19 进行了抗虫基因等位性研究结果表明 K6 K19
的抗虫基因与 R19 山西 94-24 中心 94 抗虫基因整合位点不同 K6 K19 抗虫基因间
整合位点也不同

关键词抗虫棉棉铃虫抗虫基因 PCR 同工酶

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Studies on Identification of Bt Transgenic-cotton Resistance to Insects and
Inheritance of Resistance
Name:Huoyumeng(zoology)
Surpervised by and
Abstract:
In this thesis, we identified K6 and K19 from 7030 transformed insecticidal gene
Cry1Aa by methods of PCR, Bioassay and Kana. We got high-quality cotton DNA through
the method of SDS. In PCR, we had concluded the best reaction system and reaction
procedure: total volume 20ul,buffer 2ul, MgCl ,TaqDNA polymerase ,dNTP
,primer1 and primer2 ,template DNA 3000×.We had researched the
affects of MgCl to PCR: Mg2+ is very important in PCR which concentration is affected by
EDTA, template DNA, primers, dNTP ect. When the concentration of Mg2+ is low, the
product of PCR is small; but when it is high, other ampliation e up. We had
researched affects of TaqDNA polymerase: when it is increasing, the product of PCR is
increasing; but when the Mg2+ is low, the product will reduce. When the cotton was
transformed, its isozyme system and livingness will be changed.
We have studied inher