文档介绍：山西医科大学
博士学位论文
大鼠肌肉挫伤后组织中时间相关基因表达的研究
姓名:孙俊红
申请学位级别:博士
专业:法医学
指导教师:王英元
20090214
大鼠肌肉挫伤后组织中时间相关基因表达的研究摘要差异序列两端设计特异性引物,采用运用差异显示技术结合硝酸银染色筛选大鼠肌肉挫伤后与正常肌肉表达差异种与损伤相关的敏感基因,为法医学损伤时间推断提供科学、有效的指标。方法唤】党赡闟笫笏婊治J笛樽楹驼6哉兆椤J笛樽榇笫蠼⒓∪挫伤模型,损伤后∈贝λ溃崛损伤处肌肉组织。对照组大鼠在规定时间内处死,提取相同部位肌肉组织。。捎种锚定引物和炙婊锕肿楹隙允笛樽楹投哉兆檠窘蠵扩增,扩增产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后硝酸银染色进行差异表达分析。采用煮沸法回收差异条带,并进行二次扩增,扩增产物纯化后与载体连接、克隆,进行序列分析,将测序所得差异序列与型葱员冉稀只健康成年大鼠随机分为正常对照组和损伤组,提取各组样本的总T玖戏ń蠷分析扩增曲线及溶解曲线,鉴定差异表达基因的真伪。唤】党赡闟笫笏婊治U6哉兆椤⑺鹕撕小时组和损伤后小时组。觳庹<∪庾橹⑺鹕撕小时肌肉组织和损伤后小时肌肉组织中等九种常用内参基因的表达水平,通过、和三种软件分析九种常用内参基因在肌肉组织损伤后表达的稳定性,寻找合适的内参基因。唤】党赡闟笫笏婊治U6哉兆楹退鹕俗椋⒉煌鹕耸奔浯笫蠹∪挫伤模型,提取总⒎醋B己蟛捎貌钜旎虻纳舷掠翁匾煨砸锝蠷畉扩增,分析差异基因与损伤时间的关系。捎肞公司的提取的总哂薪细的担颐挥蠨及蛋白质的污染。各样本翟..,可以保证后续验证醺行巳さ牟钜焯醮谢厥占霸倮┰觯灿醪钜焯醮玫匠晒收。刈椤⒆;袄栋装呱秆≈刈槌晒Φ脑靥澹蛄蟹治鲇条差异条带片段较长,其他条带片段较短,多数为引物二聚体序列。,且溶解曲线均为单一峰型,说明均为阳性差异片段。其中跷R阎目的的基因,⒕瑼┰觯ü,没有降解的纬鱿帧实验的准确性。山西医科大学博士学位论文
基因,与、癈匹配度较高,另外两条可能为新基因,有待于进一步研究。蚏在肌肉组织损在损伤后表达逐渐降低,,损伤后小时降低到正常对照组的叮谒鹕撕∈,损伤后∈∈被指吹浇咏正常表达量水平,损伤后小时,又出现一个小的表达高峰,,随后又下降至正常组水平。肌肉挫伤后表达量的变化幅度较小,。损伤后小时,表达量最高,为正常对照组的丁K孀潘鹕耸奔涞难映ぃ浔泶锪恐鸾ゼ跎伲小时和∈。损伤后小时,其表达量已降至正常组水平以下,小时表达量最低,为正常对照组的丁在肌肉损伤后小时内均呈现相对高表达的状态。损伤的初始阶段其表达量迅速升高,小时达到正常对照组的倍,∈贝锏一个高峰,为正常对照组的丁K婧罂J枷陆担∈贝锏阶畹捅泶锪浚U6照组的倍。在小时达到又一个高峰,为正常对照组的倍。结论通过技术共发现醪钜煨云危渲腥跤雜及的基因序列匹配度较高,另外两条可能为新基因。经实时荧光定量分析,、相对表达量与损伤时间有关,随肌肉挫伤后时间的延长呈现规律性变化,且其变化幅度较小,速度较平稳,可以考虑作为损伤时间推断的标记。关键词:肌肉挫伤,损伤时间推断,,.ü齊畉姆椒ú舛ㄋ鹕撕蟛煌奔涞慵∪庾橹谐S媚诓位虻腃值,经、及软件分析,得出伤后表达相对稳定,可以作为内参基因对目的基因进行均一化处理。而常用的一诓煌鹕耸奔浼∪庾橹斜泶锊晃榷ā⒕璕畉治觯瑂表达量分别为正常组的.%、.%、.%,
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日期:——年——月——日论文作者签名:丕划叁、切/日期:星盟年—厶月琠日学位论文独创性声明学位论文版权使用授权书属于他人的任何形式的研究成果,也不包含本人已用于其他学位申请的论文或成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。⒀?稍谙喙孛教迳隙宰髡弑救说男形=型ūǎ⒈疚陌凑昭9娑ǖ姆