文档介绍：撤副敬旋泶锒匀巳橄侔㎝细胞导师组成员:弓铡脚确鹱化疗药物敏感性的影响复旦大学硕士研究生学位论文研究生:专业:法医学导师:赵子琴教授王剑
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目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯第一部分目的基因的获得及表达载体的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯第二部分过表达细胞株的建立及鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.第三部分过表达对细胞多种化疗药物耐药性的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯第四部分过表达对细胞内阿霉素蓄积浓度的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯第五部分过表达对幌赴鲋车挠跋臁结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯至炙谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯●鸯宗帧⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..日唷璴
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过表达对人乳腺癌赴化疗药物敏感性的影响中文摘要前言多药耐药性逺О埽芯縈的产生机制对于提高乳腺癌的化疗效果有着重要域,显示其与跨膜转运体蛋白具有一定的同源性,可能具有外排化疗药物,从而导致化疗是治疗乳腺癌的重要手段之一,但许多化疗因为肿瘤细胞对化疗药物产生了的临床意义。基因是近年来发现的一个新的候选抑癌基因。该基因编码蛋白与跨膜转运体相似,影响药物敏感性、细胞代谢和生长,可能在乳腺癌佃牟中发挥一定作用。基因亦称为/疶,属父系印记基因。近年来研究表明,基因表达缺失、突变和印记异常与胚胎性肿瘤及多种实体肿瘤的发生和发展具有相关性,可能在肿瘤发生中发挥抑制作用。基因编码蛋白有十个跨膜区肿瘤细胞产生多药耐药性的功能。跨膜转运体蛋白高表达造成细胞内化疗药物外排增加,从而细胞内药物蓄积浓度降低,此种因素所导致的怀莆>涞腗机制。在经典的肋浦校幸淮类基因的表达发挥着主要作用,就是岷虾猙,超家族转运蛋白。鞍椎墓餐闶嵌季哂幸桓鯝结合盒的结构,能够与岷并水解后者,获得能量将特异性的底物泵出膜外。许多研究证明易迥承┏稍在肿瘤,尤其是乳腺癌细胞的多药耐药产生过程中发挥着重要作用,此类被证明具有多药耐药相关性的基因或者蛋白有、多药耐药相关蛋白琈、乳腺癌耐药蛋白⒎文鸵┫喙氐鞍琇取与同属于跨膜转运体蛋白家族,故推测与之相似,亦可能在肿瘤细胞中与多种化疗药物的耐药有关。本研究采用瞬时转染调高细胞中基因的表达,通过ḿ测其表达对于赴埔┪锩舾行缘挠跋欤⑹褂昧魇较赴跹芯科浔泶锒杂细胞周期以及细胞内阿霉素蓄积浓度的影响。●复旦大学硕士学位论文
./户现勿,对紫杉醇的∞由./仙.±疞玖彻,对环磷酰胺的∞由.±疞上升为.±尸第一部分目的基因的获得及表达载体的构建第二部分过表达赴甑慕⒓凹第三部分过表达对赴多种化疗药物耐药性的影响目的从组织中获取基因全长片段,并构建真核表达载体。方法设计含有酶切位点的引物,通过逆转录幼橹谢袢∪ǔ基因片段,┰龊缶盖杏氡泶镌靥錺连接,并由酶切鉴定和测序验证基因片段正确性。结果成功从组织中获得基因全长片段,并构建真核表达载体一盖屑ḿ安庑蛭尬蟆目的建立并鉴定基因表达上调的赴辍方法通过转染感受态细菌扩增表达质粒,紫外分光光度计检测质粒的浓度及质量,通过脂质体法将一H綧一赴怪糜ü庀晕⒕导转染效率,觳釹騧表达上调程度。结果质粒扩增获得了浓度及质量较高的质粒溶液;一—质粒转染效率可达%以上,空质粒转染效率达%ィ挥胷椒ㄔ诹阶细胞株中均检测到表达,空质粒转染组及重组质粒转染组中的表达量分别为...,,显示转染入重组质粒后,基因在细胞中的表达明显上升。目的研究过表达对赴⒚顾亍⒆仙即肌⒒妨柞0贰⒚淄休祯ā顺铂耐药性的影响。方法ḿ觳庾H維笕橄侔┫赴闙的各化疗药物变化;应用软件进行统计分析。结果过表达的赴攵哉兆橄啾龋园⒚顾氐囊┪锩舾行韵陆不明显,对紫杉醇,环磷酰胺,米托葸醌的敏感性均明显下降,对顺铂的敏感性明显上升。转染组细胞较空质粒转染组对阿霉素的∞由./仙●复旦大学硕士学位论文
转染组细胞增殖能力明显下降现卿。转染组细胞/F谙赴殖埂L崾維泶镌斐蒑发生F谧柚停种葡赴鲋场第四部分过表达对赴第五部分过表达对赴鲋车挠跋阿霉素蓄积浓度的影响结论现悦淄休啧ǖ腎缬.±疞上升为./尸諳;对顺铂的的由疞下降为繭./尸。目的研究过表达对赴诎⒚顾匦罨ǘ鹊挠跋臁方法转染组和空质粒转染组细胞分别加入相同浓度的阿霉素,培养相同时间后通过流式细胞仪检测两组细胞内阿霉素蓄积浓度的差异;结果转染组和空质