文档介绍：福建医科大学
硕士学位论文
肠球菌心内膜炎抗原efaA在粪肠球菌生物膜形成中的作用
姓名:吴海珍
申请学位级别:硕士
专业:病原生物学
指导教师:强华
2011-03
肠球菌心内膜炎抗原 efaA 在粪肠球菌生物膜形成中的作用
中文摘要
目的:探讨肠球菌心内膜炎抗原 efaA 与肠球菌生物膜形成之间的相关性,为深入
研究肠球菌生物膜的致病性及耐药性奠定基础。
方法:
1. 利用普通光学显微镜观察 efaA+、efaA- 粪肠球菌在玻片上的生物膜形成过程,
初步判定肠球菌生物膜形成各阶段的时间点;
2. 微量滴定板法比较 efaA+、efaA- 粪肠球菌的生物膜形成能力:细菌接种至 96 孔
板中,培养不同时间后弃去培养液,结晶紫染色,乙醇-丙酮混合液溶解,酶标仪测定
+ -
比较不同阶段 efaA 、efaA 菌的 OD570 值;
3. MTT 法比较 efaA+、efaA- 粪肠球菌生物膜的活菌含量: 细菌接种至 96 孔板中,
培养不同时间后弃去培养液,MTT 孵育后 DMSO 溶解,酶标仪测定比较不同阶段 efaA+ 、
-
efaA 菌的 OD492 值;
4. 共聚焦激光扫描显微镜观察比较 efaA+、efaA- 粪肠球菌所形成的生物膜:各菌
株在玻片上形成生物膜,AO/EB 染色后 CLSM 观察,比较 efaA+、efaA-菌所形成生物膜
的厚度及生物膜内层、中层、外层的细菌密度和活菌比例,并做统计学分析。
5. 采用 SYBR GreenⅠ实时荧光定量 PCR,检测 efaA+、efaA- 粪肠球菌在细菌培养
皿内培养不同时间后所形成生物膜的 efaA mRNA 的表达,与生物膜的厚度变化进行对
比。
结果:
1. 肠球菌生物膜黏附期为 2h,基本形成期为 6h,成熟期为 24h,播散期为 48h。
+
2. 微量滴定板法比较生物膜形成能力,efaA 粪肠球菌在各培养时间点的 OD570 均
大于 efaA- 菌,即 efaA+ 粪肠球菌的生物膜形成能力比 efaA- 菌的强;
+
3. MTT 法比较生物膜不同阶段的活菌含量(OD492),efaA 粪肠球菌在各培养时间
- + -
点的 OD492 均大于 efaA 菌,即 efaA 粪肠球菌所形成的生物膜的活菌数比 efaA 菌的多;
4. 共聚焦激光显微镜观察,efaA+ 粪肠球菌在不同阶段所形成的生物膜的厚度、细
菌密度及活菌比例均比 efaA- 菌的大;
5. efaA+ 粪肠球菌 efaA mRNA 的表达量随培养时间的延长而增加,24h 时达最高水
3
平,随后表达量降低,与生物膜平均厚度变化趋势相平行;efaA- 粪肠球菌未检测到 efaA
mRNA 表达。
结论:肠球菌心内膜炎抗原 efaA 基因有利于肠球菌的粘附和生物膜形成。
关键词:粪肠球菌生物膜 efaA CLSM 实时荧光定量 PCR

4
Effect of us endocarditis antigen efaA on the forming
process of us faecalis biofilms
Abstract
Objective: In this work we investigate the relationship between us endocarditis
antigen(efaA) and biofilm formation, in order to do the groundwork for further study of
biofilm’s pathogenicity and antibiotics resistance.
Methods:
1. Using ordinary optical microscope to observe the biofilm formation of efaA+, efaA-
on cover glasses at different incubation time,we generally identify biofilm
formation time.
2. 1% crystal violet(CV) stain the adhesion of different stages’ i on