文档介绍：实验四生活力测定
一、目的
种子生活力测定的目的是:
1. 快速估测种子样品的生活力,特别是休眠种子样品的生活力;
2. 某些样品在发芽测定结束时剩有较多的休眠种子未能萌发,此时可以逐粒测定这些种子的生活力,也可以再取一份样品测定样品的生活力。
二、定义
种子生活力是用染色法测得的种子潜在的发芽能力。
三、应用范围
本测定适用于附录B表B2给出方法的树种
四、原理
1. 四唑测定原理
应用2,3,5-三苯基氯化(或溴化)四唑(2,3,5-triphenyl tetrazolium chloride of bromide)的无色溶液作为指示剂,以显示活细胞中所发生的还原过程。这种指示剂被种子吸收,在种子组织内与活细胞的还原过程起反应,从脱氢酶接受氢。在活细胞中,2,3,5-三苯基氯化四唑经氢化作用,生成一种红色而稳定的不扩散物质,即三苯基甲肤(triphenyl formazan)。这样就能识别种子中红色的有生命部分和不染色的死亡部分。除完全染色的有生活力种子和完全不染色的无生活力种子外,还会出现一些部分染色的种子。在这些部分染色种子的不同部位看到其中存在着或大或小的坏死组织,它们在胚和(或)胚乳(配子体)组织中所处的部位和大小(不一定是颜色的深浅),决定着这些种子是有生活力还是无生活力。不过同组织的健全程度相关的颜色差异仍然被认为具有决定性意义,主要是因为在某种程度上,它们有助于识别出健全、衰弱或死亡组织并确定其位置。
2. 靛蓝测定原理
靛蓝(indigo carmine)为蓝色粉末,分子式为C16H8N2O2(SO3)2Na2。靛蓝能透过死细胞组织使其染上颜色。因此,染上颜色的种子是无生活力的。根据胚染色的部位和比例大小来判断种子有无生活力。
五、试剂
1. 使用氯化(或溴化)四唑的水溶液,浓度随树种而略有不同,见表B2中的规定。~,可将四唑溶于缓冲溶液。缓冲溶液的配制方法如下:
溶液a--在1 (KH2PO4);
溶液b--在1 (Na2 H2PO4o2H2O),(Na2 H2PO4)。
取溶液a 2份和溶液b 3份混合,配成缓冲溶液。
在该缓冲溶液里溶解准确数量的四唑盐,以获得正确的浓度。例如,每100ml缓冲溶液中溶入1g四唑盐即得1%浓度的溶液。最好随配随用。剩余的溶液可在短期内贮于低温1~5℃的黑暗条件下。
2. %~%的溶液,如发现溶液有沉淀,可适当加量,最好随配随用,不宜存放过久。
六、方法步骤
1. 测定样品提取
从净度测定后的纯净种子中随机数取100粒种子作为一个重复,共取4个重复。
2. 种子预处理
(1)去除种皮
为了软化种皮,便于剥取种仁,要对种子进行预处理。较易剥掉种皮的种子,可用始温30~45
℃的水浸种24~48h,每日换水,如杉木、马尾松、湿地松、火炬松、黄山松、米老排、安息香、黄连木、杜仲等。硬粒的种子如楹树、南洋楹、银合欢等可用始温80~85℃水浸种,搅拌并在自然冷却中浸种 24~72h,每日换水。种皮致密坚硬的种子,如孔雀豆、台湾相思、黑荆树、黑格、白格、漆树和滑桃树