文档介绍：山东农业大学
硕士学位论文
糖皮质激素对肉仔鸡骨骼肌蛋白代谢影响的研究
姓名:高静
申请学位级别:硕士
专业:动物营养与饲料科学
指导教师:林海
2011-06-13
山东农业大学硕士学位论文
摘要
为探讨糖皮质激素对肉仔鸡骨骼肌蛋白代谢的影响,本研究从体内试验和体外试验
两方面入手,体内试验用人为导入外源糖皮质激素的方法,体外试验离体培养骨骼肌成
肌细胞并用糖皮质激素处理,观察糖皮质激素对蛋白的合成途径和蛋白的分解途径的数
个关键基因 mRNA 的相对表达量的变化情况,为骨骼肌蛋白代谢的基因表达调控的网
络构建以及研究骨骼肌蛋白代谢的详细的分子机制提供理论依据。
体内试验分两部分:试验一选取 28 日龄体重相近的 AA 雄性肉鸡 288 只,随机分为
正常日粮组和高蛋白日粮组,经过三天日粮适应期后,每个组随机分为三个处理:糖皮
质激素处理组(DEX)、对照组、限饲组,每个处理 3 个重复,每个重复 12 只鸡,糖皮
质激素处理组 8:30 和 20:30,腹部皮下注射地塞米松 体重,对照组、限饲
组注射与糖皮质激素处理组等体积的生理盐水,限饲组饲喂糖皮质激素处理组前一天的
采食量。34 日龄晚 20:30 开始禁食。禁食后再饲喂组在 35 日龄早上 8:30 再饲喂一小
时后采样。各试验鸡均翅静脉采血,3000r/min 离心 10min,分离血浆,-20℃冷冻保存。
取胸大肌(M. pectoralis major,PM),液氮速冻,-80℃贮存。同时取部分组织样品。取
全部胸肌称重,测定胸肌指数(胸肌重/活体重),取右腿全部肌肉称重,测定腿肌指数
(腿肌重/活体重)。结果表明,糖皮质激素能使日增重显著降低,采食量无显著影响。
糖皮质激素能使血浆中尿酸、T-AA、胰岛素的浓度显著上升。糖皮质激素能显著上调
蛋白质分解途径相关基因的表达,对蛋白质合成途径的相关基因的抑制作用不明显。高
蛋白日粮对缓解糖皮质激素的作用不明显。试验二选取 35 日龄体重相近的 AA 雄性肉
鸡 72 只,随机分为 2 个组:糖皮质激素处理组(DEX)和对照组,每个处理 3 个重复,
每个重复 6 只鸡。36-38 日龄,8:00 和 20:00,糖皮质激素处理组皮下注射地塞米松
体重,对照组注射相同体积的生理盐水。38 日龄 20:00 禁食 12h,禁食后(每
个处理 3 个重复,每个重复取 4 只鸡)空腹采血,然后每个处理分 A、B 两个处理进行
灌服处理:A 组灌服亮氨酸 500mg/Kg 体重,B 组灌服生理盐水 5ml,灌服后 1h,各试
验鸡均翅静脉采血,3000r/min 离心 10min,分离血浆,-20℃冷冻保存。取胸大肌(M.
pectoralis major,PM),液氮速冻,-80℃贮存。同时取部分组织样品。取全部胸肌称重,
测定胸肌指数(胸肌重/活体重),取右腿全部肌肉称重,测定腿肌指数(腿肌重/活体重)。
结果表明,糖皮质激素能使日增重显著降低,采食量无显著影响。糖皮质激素能显著促
进蛋白质分解途径相关基因的表达。灌服对缓解糖皮质激素的作用也不明显。
1
糖皮质激素对肉仔鸡骨骼肌蛋白代谢影响的研究
体外试验分两个试验:试验三培养骨骼肌成肌细胞,细胞在含有 10%的胎牛血清的
DMEM 培养基中生长,当细胞铺满六孔板的 70%时,更换成含有 2%马血清的 DMEM
培养基诱导成肌细胞分化成肌管,分化时间为 48h,分化成肌管的成肌细胞经过 1h 的无
血清处理后,用处理液处理,试验分四个处理:正常培养基、地塞米松处理(1um)、胰
岛素处理(100nm)、地塞米松和胰岛素共同处理(DEX:1um;INS:100nm),处理液
处理 3h。结果表明,糖皮质激素能显著抑制 IGF-I mRNA 的表达,显著上调 MyoG mRNA
的表达,INS 能显著上调 MyoG mRNA 的表达,显著抑制蛋白质分解途径的相关基因的
表达,在 INS 存在时,糖皮质激素能上调 MyoD、Atrogin-1 的表达,提示糖皮质激素参
与了细胞的新陈代谢。试验四是使用已分化成肌管的成肌细胞经过 1h 的无血清处理后,
再用处理液处理,试验分两个处理:正常培养基、RU486(100nm)和地塞米松(1um)
共同处理,正常培养基处理 4h,RU486 处理 1h 后,再用 RU486 和 DEX 共同处理 3h。
结果表明,RU486 对 IGF-I、MyoD、MSTN、MuRF1mRNA 的表达量均无显著影响,
说明 RU486 能抑制 DEX 的作用。
关键词:糖皮质激