文档介绍：河北医科大学
硕士学位论文
沙门氏菌脂肪酸分型的研究及快速诊断方法的建立
姓名:宋红梅
申请学位级别:硕士
专业:病原生物学
指导教师:金玉怀
20090301
沙门氏菌脂肪酸分型的研究及快速诊断方法的建立该系统在我国的应用受到一定的限制。本研究选择年旰颖笔鲅G逍偷株沙门氏菌分离株进行脂肪酸分型研究,目的是建立适合我国沙门氏菌脂肪酸分型快速诊断的实验条件和方法,探讨我国沙门氏菌流行株的脂肪酸构成特征,在提供我国沙门氏菌脂肪酸组成摘要目的:沙门氏菌是国际公认的危害最严重的食源性致病菌。传统的沙门氏菌检测方法操作繁琐,通常需时天;在流行病学诊断中常用的沙门氏菌分子生物学分型方法,要在获得可疑爆发菌株纯培养物的基础上进行,不仅消耗大,需时也较长,难以满足食物中毒快速诊断及有效防控的需要。脂肪酸分型方法将甲基脂肪酸提取与灵敏的气相色谱检测法结合,通过分析微生物细胞膜上的磷脂脂肪酸的组成,来鉴定微生物的种属、分析微生物的多样性。基于此原理开发的微生物鉴定自动化系统可比传统方法最少提前鼍呒ń峁竦玫氖菘直接应用系统附带的软件进行基于菌株脂肪酸成分的聚类分析,大大缩短流行病学诊断所需时间,且操作简便,特别适用于大通量标本的分析。但是,现有的数据库中仅包含五种血清型沙门氏菌的脂肪酸数据,尤其是不包括我国流行的沙门氏菌脂肪酸成分的基础资料,使得中文摘要
嘌トハ宋嘌蜓媾嘌两种条件下型方法对株分离于一起沙门氏菌食物中毒的可疑爆发本底资料基础上,补充和完善沙门氏菌脂肪酸数据库,为在我国应用猩趁攀暇焖僬锒咸峁┮据。方法:趁攀暇舅岱中涂焖僬锒戏椒ǖ慕ⅲ航砘乱沙门氏菌标准株分别在培养基℃培养培养,提取脂肪酸进行鉴定,分别与虲数据库匹配。另在培养条件固定前提下设置一、~、。三个取菌量组,分别在不同获菌量条件下对猪霍乱标准株进行脂肪酸提取和鉴定。实验各重复十次,确立沙门氏菌脂肪酸分型鉴定的最佳培养条件及最佳获菌量范围。应用建立的方法对晟趁攀菌及攴巧趁攀暇兄舅岱中图ǎ兰鄯椒ǖ准确性、特异性、重复性。趁攀暇舅岱中脱芯浚河τ媒⒌姆椒ǘ年~年河北省个血清型的晟趁攀暇掷胫进行脂肪酸组成及含量分析,提供我国沙门氏菌流行株特征脂肪酸组成数据,评价脂肪酸分型方法对沙门氏菌的分型能力。舅岱中陀肼龀宄∧旱缬痉中椒在食物中毒流行病学诊断上的应用比较:同时应用两种分株及株非相关的沙门氏菌分离株进行菌株同源性分析。比较方法间优劣,探讨脂肪酸分型方法在流行病学诊中文摘要
结果:应用培养基进行细菌的分离培养和控制其中所有菌株都含有的脂肪酸成分有种,占优势的脂和脂肪酸分型方法进行菌株同源性分析结果显示,在小样结论:呕讼妇舅岱治龇中偷氖笛樘跫⒘松门氏菌脂肪酸分型标准参考方法。使用培养基,断上的应用前景。获菌量为,进行沙门氏菌脂肪酸分型,%,重复性为%。以此作为标准参考方法对个血清型的晟趁攀暇分离株进行脂肪酸分析,共得到植煌舅岢煞郑肪酸成分为::、:、琒,较数据库多了:、:、:2煌G逍蜕趁攀暇有脂肪酸成分非常接近,仅有种脂肪酸成分的差异。本次检测的肠炎沙门菌分离株具有另外四种共有成分、:、:恢砘袈疑趁啪哂另外两种共有成分:,而缺少了:。本实验中肠炎沙门菌:康陀谑菘馐荩含量远高于库中值;猪霍乱沙门菌:含量远低于数据库数值,而:扛哂诳庵兄怠M痹擞肞本暴发资料的研究中脂肪酸分型方法能够反映菌株之间的亲缘关系,聚类结果与脉冲场分型总体一致。但在菌株同源性判断的精确性上与细菌分型“金标准”还有差距。中文摘要:
。嘌,控制获菌量在一竦玫沙门氏菌的脂肪酸数据与数据库匹配最佳,鉴定结果最准确。在此基础上建立的沙门氏菌脂肪酸分型快速诊断方法可通过单次实验较准确地将沙门氏菌鉴定到种。峁┝宋夜趁攀暇餍兄曛舅嶙槌杀镜鬃柿希补充和完善了沙门氏菌脂肪酸数据库。ü肼龀宄》中头椒ū冉希教至酥舅岱中头法在流行病学诊断方面的应用价值,为其在流行病学领域的应用提供了依据。关键词:沙门氏菌;脂肪酸甲酯谱图;分型;食物中毒;快速诊断中文摘要
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