文档介绍：华中科技大学
硕士学位论文
美满霉素对癫痫大鼠海马神经元凋亡的影响
姓名:尧青
申请学位级别:硕士
专业:人体解剖与组织胚胎学
指导教师:李正莉
2011-01
华中科技大学硕士学位论文
美满霉素对癫痫大鼠海马神经元凋亡的影响
硕士研究生尧青
导师李正莉教授
华中科技大学同济医学院人体解剖与组织胚胎学系武汉 430030
中文摘要
癫痫是一种常见的慢性神经系统疾病,由于其发病机制的复杂性和癫痫类
型的多样性,癫痫的防治至今仍然是神经科学工作者攻克的重点课题。癫痫发
作可以导致脑内多种凋亡相关基因的表达和神经元的凋亡,并且以海马神经元
凋亡最为显著,这可能是导致癫痫患者后期认知功能障碍和情感障碍的原因之
一。有研究表明,第二代半合成的四环素类衍生物美满霉素(Minocycline,MC),
在中枢神经系统损伤和神经退行性疾病的动物模型中具有神经保护作用,并提
出美满霉素的神经保护机制与其减少神经炎性和阻碍细胞死亡这两个方面有
关,但它在癫痫中的研究还比较少,因此,本研究旨在探讨美满霉素对癫痫模
型大鼠海马神经元的抗凋亡保护作用,以期为癫痫的临床治疗提供实验依据。
采用 SD 雄性大鼠 96 只,随即分为三组:生理盐水对照组(NS 组),海
人酸致痫组(KA 组)和美满霉素预处理+海人酸组(MC+KA 组)。KA 组侧
脑室注射 KA(2μg/kg)以致痫,NS 组则注射等容量的生理盐水,MC+KA 组先腹
腔注射 MC(45mg/kg)预处理,12h 后侧脑室注射 KA(2μg/kg)以致痫,KA 处
理 30min 后再次腹腔注射 MC 90mg/kg。各组大鼠在侧脑室注射造模后观察其
行为学变化 2 小时左右;并于存活 2h、8h、24h 和 48h 后分批处死动物。采用
免疫组织化学 SABC 法显示大鼠海马部位细胞色素 C(Cytochrome C ,Cyt C)
和 caspase-3 免疫反应的变化;RT-PCR 法检测 caspase-3 mRNA 含量;Western
Blot 法检测 Bcl-2 和 Bax 蛋白表达情况。
结果发现,NS 组大鼠行为表现无异常;KA 致痫组大鼠癫痫发作达Ⅳ~Ⅴ
级,可持续 2h 左右;MC+KA 组大鼠癫痫发作强度较 KA 致痫组明显减弱,为
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Ⅱ~Ⅲ级。免疫组织化学方法结果显示:在 KA 致痫后 2h Cyt C 即开始有阳性
表达,8h 达到高峰,24h 表达减少,而 MC 预处理明显减弱此效应。RT-PCR
和免疫组织化学方法结果显示 caspase-3 mRNA 的含量及 caspase-3 免疫反应性
在 24h 时间点三组之间无明显差异,在 48h 时间点,KA 组明显高于对照组
(P<),MC 预处理则明显拮抗 KA 诱导的 caspase-3 高表达。Western Blot 结
果显示:大鼠海马组织 Bcl-2 和 Bax 蛋白的表达水平呈负相关。与对照 NS 组相
比,KA 组 Bcl-2 蛋白表达降低而 Bax 蛋白表达升高;与 KA 组相比,在 MC+KA
组 Bcl-2 蛋白表达升高而 Bax 蛋白表达降低。且 Bcl-2/Bax 值在 48h 时间点比
24h 时间点更低。
上述研究结果提示,KA 致痫能诱导大鼠海马神经元凋亡,而 MC 预处理
不仅能抑制 KA 诱导的致痫效应,而且能减少 Cyt C 从线粒体释放入胞浆,从
而减少凋亡体的生成;并抑制凋亡效应蛋白 caspase-3 的激活,抑制细胞凋亡的
发生;另外还通过增大 Bcl-2/Bax 的比值抑制凋亡发生,这些结果提示 MC 对
KA 致痫大鼠海马神经元发挥了抗凋亡的神经保护作用。这对于临床癫痫防治、
神经保护有重要的启示意义。
关键词:癫痫;海马神经元;美满霉素; 凋亡; 海人酸
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the Effection of Minocycline to Apoptosis of Hippocampal
Neurons on Epilepsic Rats
Master Candidate:YAO Qing
Supervisor:Prof. LI Zheng-li
Abstract
Epilepsy is mon chronic disease in the nervous system. Due to the
complexity of its pathogenesis and the diversi