文档介绍：山东省医学科学院
硕士学位论文
人HMGB1-boxA基因克隆及其原核表达载体的表达
姓名:金炎
申请学位级别:硕士
专业:免疫学
指导教师:赵跃然
20090301
人瓸幕蚩寺∮氡泶导师赵跃然中文摘要专业免疫学研究生金炎目的斟。头胖涟夂螅珺盒是引起炎症反应的功能域,,均由约个氨基酸残基构成,呈较强的碱性,为与翘匾旖岷内参与细胞分化、薷础重组及类固醇激素调控等生命活动。尽管终术产物受体与哂懈咔缀土Γ荋的主要受体。化蛋白一暮四谧R疲剐矶嗥渌仔砸蜃尤鏘加强和释放增多而启动炎症或使炎症恶化【。现已发现脓毒血症患者的还是多种自身免疫性疾病的重要免疫原。谘字⒅械暮诵牡匚槐砻使,并且单独即可发挥致炎作用。与此相反,单独则具有显著抑制捌鋌卵鬃饔玫哪芰Γ忠殉晌狧有效的拮抗剂。现已研发了多种在动物实验中有明显效果的卓辜粒俅残Ч写芯俊高迁移率族蛋白遣溉槎锵赴泄惴罕泶锏暮说鞍祝玫鞍有一定的拮抗作用;核外隓非特异性结合,亲和力低,在细胞核鞍兹鄙僖茧模也荒艽┏瞿谥释透叨赴鳎钥赏ü罨细胞的主动分泌和坏死细胞的被动释放进入胞外。在胞外,R恢种匾的炎症介质和致炎细胞因子,是启动和维持炎症瀑式反应的中心分子,与脓毒症、关节炎、急性肺炎、肝炎、自身免疫性疾病等的发病机理关系密切【。胞外栌胂嘤Πな芴褰岷喜拍芊⒒悠渖镅вΑM砥谔腔隦岷虾螅梢牧姿峄⒑俗B家蜃覰甂突、甉、.缺泶水平显著增高,且患者的皆礁撸渌劳龅目赡苄栽酱蟆A硗猓琀芸赡艹晌<膊≈瘟频挠行О械惴肿印现有研究表明,在胞外,闹卵鬃饔弥饕J怯善鋌峁褂蚶葱山东省医学科学院硕士学位论文
方法和结果端加上限制性酶切位点ィ虰。设计上游引物时,在成熟人结论而得到纯化的重组蛋白,为进一步研究其生物学活性打下基础。限制性酶谱分析筛选出阳性克隆,=刈榈难粜钥寺≈杲杏盏迹煤避星嗝顾氐腖培养基。嘌小时,再于。盏小时后,离心集菌,做甈酉赴惺头诺牡鹘诨啤的信号转导机制还需要深入研究和阐明。本课题以此为思路,将産幕蚩寺〔⒃诖蟪Ω司泶铮墒烊薎瓸幕蚩寺〖靶蛄蟹治取正常人新鲜外周血,提取单个核细胞,用本室制备的崛∈约梁蟹离纯化细胞总R訰为模板,随机六聚体核苷酸为引物,在甅逆转录酶的作用下进行反应,合成的第一链。根据産谋码序列,设计扩增成熟人籦虻囊欢砸铮直鹪谏舷掠我’籦嗦胄蛄械纳嫌渭由掀鹗济苈胱覣,同时在上游加上保护性碱基,下游引物加上,降低浚乐苟督峁沟男纬桑岣咧刈榈白质的表达含量。以》从Σ颿D0澹肨酆厦附蠵扩增産颉S玫腿鄣闱碇悄旱缬痉掷氪炕疨扩增产物后,与靥辶樱;蟪Ω司又钟诤/氨苄青霉素的平板。用菌落拖拗菩悦钙追治錾秆〕鲅粜钥寺。〉,构建重组産泶镌靥濉V刈樽油镁銹和凝胶电泳分析,结果发现在处可见一条大量表达的蛋白条带。下一步我们将进行分析。人—的基因克隆及其表达籘/籦
关键词高迁移率族蛋白豢寺∮氡泶铮淮蟪Ω司晒寺×,序列分析显示,克隆的基因序列和文献报道一致。ü,为人成熟瓸蛟谠吮泶镌靥宓谋泶锏於嘶重组蛋白;原核表达载体山东省医学科学院硕十学位论文
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主要符号表氨苄青霉素碱基对二氨基联苯胺固克岫抑寤叶艾氏大肠杆菌乙醇死嗷蜃榧苹死嗷蜃樽橹高迁移率族蛋白千道尔顿培养基内毒素脂多糖嗫寺∥坏信使苛言せ畹牡鞍准っB家蜃雍艘蜃觢白介素一桓扇潘肿瘤坏死因子饷芏聚丙烯酰胺凝胶电泳庵苎5ジ龊讼赴磷酸盐缓冲液聚合酶链反应孀B孀B糚晚期糖基化终术产物受体山东省医学科学院硕十学位论文甤一猀
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