文档介绍：西南大学
硕士学位论文
MGB荧光定量PCR鉴别检测猪瘟病毒及其动态分布规律研究
姓名:刘俊
申请学位级别:硕士
专业:预防兽医学
指导教师:黄伟;王琴
20090601
ü舛縋鉴别检测猪瘟病毒及其动态分布规律研究预防兽医学专业刘俊指导教师黄伟副教授王琴研究员手两芰猪瘟又称经典猪瘟珻怯芍砦敛《珻、,鹬淼母叨戎滤佬浴⒔哟バ源静 1狙芯拷⒘薈岸局暧胫砦镣化弱毒疫苗株琀的鉴别检测方法,并完成了试剂盒的初步组装。同时以猪的看家基因產作为内参,建立了核酸的相对定量方法,并采用该方法分析了石门株急性感染后的复制规律、动态分布规律和组织嗜件规律。为了从定量的角度探讨急性感染后病毒的复制规律、动态分布规律和组织嗜性规律,同时为鉴别检测提供可靠的技术支持。本研究将荧光定量—技术和考觳庀低诚嘟岷希訥公布的全序列、牛病毒性腹泻病病毒全序列和绵羊边界病病毒蛄薪凶酆媳榷裕杓屏艘惶渍攵訡野毒株的特异荧光探针和引物;同时,针对猪看家基因序列,设计了另一套特异性引物和探针作为内参。经过体系和反应条件优化,建立了一套相对定量核酸的—椒ǎ珻虯┰鲂史直鹞%,相关系数均为。实验结果证实,该方法对、种猪相关病原核酸扩增阴性,显示良好的特异性,同时对Ъ批次疫苗核酸扩增为阴性,避免了对实验的干扰,因此,该方法能鉴别检测野毒株和株;该方法灵敏度比本实验室建立的个数量级,检测极限达病毒核酸;个质控样本在鲈履诘腃当湟煜凳..%,均小于椒ň哂泻芎玫奈榷ㄐ裕欢份临床疑似难本检测结果证实,该方法与姆下饰%。同时我们用方法和猪瘟免疫荧光方法对北京某猪场喾荼馓姨逖窘屑觳猓峁な两种方法具有较高的符合率。采用血毒∪庾⑸涓腥樟涑ぐ字恚鄙枇头%,说明该—摘要
阴性对照。感染全程进行体温监测和临床症状计分【浚腥竞竺刻焖婊噬头,采集体内各主要淋巴结、扁桃体、脾脏、肾脏、肠道、心肌、脑组织等共种组织、器官,并采用方法【俊蠧腇考觳猓恐副晡O喽愿腥久芏龋吹ノ幌赴诟染病毒的核酸含量。定量检测结果显示:瓹血毒感染螅腥局肿橹器官均能检测出核酸;痈腥竞蟮趌天到濒死前第欤肿橹⑵鞴俚腃感染密度均呈总体上升趋势。与第毂龋爻Α⒏卧嗪万⑾铝馨徒岬天的感染密度分别上升、和个数量级,上升最快。上升最慢的为肾脏和肌肉,增幅分别为和个数量级;瓹谝认佟⒊ο的ち馨徒帷⒏构晒盗馨徒帷⒒爻ΑⅡ⑾铝馨徒帷⑵脏、空肠、皮肤、肺、肝脏、扁桃体、直肠、回盲瓣、肾脏、脊髓、食道、膀胱、胃、十二指肠、肌肉、脑组织和心肌中的相对感染密度分别为、、、,、、和个数量级。阴性对照猪上述组织、器官均朱检出核酸。体温监测和临床症状计分结果显示:血毒感染后,从第炜J迹偈鱿质秤降、精神萎顿、体温升高,其后体温逐渐上升,此间临床症状计分迅速增加,伴随体温升至℃左右,稽留,其问食欲下降至废厥,精神萎靡、站立不稳,此后体温开始回落;至频死前第天,临床症状计分达最高值.,感染猪出现呼吸急促、消瘦、倒地、抽搐;耳、鼻、四肢、腹部皮肤潮红、瘀斑;至频死期时体温回落至.℃。整个病稃的加重程度与病毒载量的增加里正相关。。免疫组化检测结果显示,抗原信号在感染后纯稍诒患肿橹⑵鞴僦屑测到,初期阳性信号主要集中于毛细血管内,其后逐渐弥散到毛细血管外,进入外周组织细胞内,在胞内出现阳性信号,且信号呈现增强趋势。阴性对照猪试验期间呈健康状态,未见阳性信号。采用荧光方法全面系统地对人工急性感染后的试验猪进行了繁殖动态与组织嗜性的研究,其研究结果与感染后的致病特征与临床症状和免疫组化相符本研究建立的鉴别检测方法为木换峁┝丝煽康募际踔С牛煌苯溆用于的繁殖动态和组织嗜性研究,为弄清的病原特性,致病机理奠定了基础。关键词:猪瘟;鉴别检测;动态分布;秸耄挥ü舛合。、、、、、、、、、、、、、,
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学位论文拓者:导师龅多眵学位论文作者签名:如曼学位论文版权使用授权书独创性声明≯圹年拢H学位论文题目:巡垦兹迸塞量￡鸭藜觳庵眇愣灰钾┗滩橘莶槿そ珏盔本人提交的学位论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中引用他人已经发表或出版过的研究成果,文中已加了特别标注。对本研究及学位论文撰写曾做出贡献的老师、朋友、同仁在文中作了明确说明并表示衷心感谢。本学位论文作者完全了解西南大学有关保留、使用学位论文的规定,有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允C艿难宦畚脑诮饷芎笫视帽臼谌ㄊ椋韭畚模捍巡槐C埽口保密期限至年月止签字日期:许论文被查