文档介绍：南华大学心血管病研究所,动脉硬化学湖南省重点实验室报告人: 尹凯(博士研究生) 导师:唐朝克(教授) TOLL 样受体适配蛋白 MyD88 偶联胆固醇逆向转运与炎症 KA Smoak , et al. Cell Metabolism, Jun 2010; 11(6): 493-502. ( IF: ) 一、研究背景 1、高密度脂蛋白( HDL )与心血管疾病的风险呈负相关,促进胆固醇逆向转运( RCT )是其抗动脉粥样硬化( As)的关键机制。 3、最新的研究显示 apoA-I/ABCA1 途径具有抗炎作用,将为 As 的防治提供新的思路。 2、 ApoA-I/ABCA1 途径介导细胞内胆固醇流出,是 RCT 的关键环节,也是目前研究最多的领域。二、 ApoA-I/ABCA1 途径抗炎的可能机制 Kai yin,Duan -fang Liao,Chao-ke tang. ABCA1 : A Possible Link Between Inflammation And Reverse Cholesterol Transport. Mol Med, Sep 2010; 16(9-10): 438-49. ( IF: ) ? 三、研究方法 1、以脂多糖( LPS )处理的 THP-1 巨噬细胞作为炎症细胞模型,观察 apoA -I对 TNF α表达的影响。 2、采用核连缀试验观察 apoA -I对 TNF α转录的影响。 3、利用放线菌素 D终止转录,观察 apoA -I 对 TNF α mRNA 降解的影响。 4、利用 SiRNA 干扰等技术探讨 apoA -I 促进 TNF α mRNA 降解的分子机制。第一部分: ApoA -I通过转录后途径调节 TNF α表达四、研究结果图1. ApoA -I下调 LPS 诱导的 TNF- α蛋白水平图1. Western-blot 检测 TNF- α的蛋白质表达图2. 核连缀实验显示 apoA -I对 TNF α转录无明显影响图2:核连缀转录分析检测 apoA -I对 TNF- α转录的影响图3. ApoA -I显著下调 LPS 诱导的 TNF- α mRNA 水平图3. 荧光定量 PCR 检测 TNF- α的 mRNA 表达水平图4. ApoA -I促进 TNF α mRNA 的降解图4. 放线菌素 D( act D )终止转录, 检测不同时间点 TNF α的 mRNA 水平。图5. 含 TNF- α 3`UTR 的 CAT 报告基因的构建 pCAT -control pCAT-TNF-3`UTR pCAT-TNF-3`UTR-ARE pCAT-TNF-3`UTR-ARE mut 图5. 构建含 TNF- α 3`UTR 不同序列的***霉素乙酰转移酶( CAT )报告基因载体,转染 THP-1 巨噬细胞。