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流式细胞术贝克曼.pptx

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流式细胞术贝克曼.pptx

上传人:wz_198613 2021/2/17 文件大小:1.35 MB

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流式细胞术贝克曼.pptx

文档介绍

文档介绍:,监测细胞免疫状态


.
:粘附分子;TCR多态性检测;肿瘤癌基因及
抑癌基因蛋白产物的检测;细胞内酶;耐药蛋
白的分析等等。
临床应用
疾病诊断:为疾病诊断提供直接的或支持诊断的依据
免疫调节:细胞因子/受体的相互作用
共刺激分子受体/配体的相互作用
发病机理:肿瘤的发病与机体的免疫力低下、以及信号传递
障碍有关
药物/疫苗效果的评价:肿瘤生物治疗的时机选择、以及效果
的监测
免疫状态评价: 移植、放化疗等.
细胞周期分析:在细胞周期(G0,G1,S,G2 ,M)的各个时期,DNA的含量随各时相呈现出周期性的变化。通过核酸染料标记DNA,并由流式细胞仪进行分析,可以得到细胞各个时期的分布状态,计算出G0/G1%,S%及G2/M%。了解细胞的周期分布及细胞的增殖活性。也可利用细胞周期蛋白(CYCLIN)、Ki67、核增殖抗原(PCNA)等,对细胞周期进行精确的分期:G0、G1、S、G2、M.
DNA含量及细胞周期分析
G2
M
G0
G1
s
0
200
400
600
800
1000
G0
G1
s
G2
M
DNA Analysis
DNA content
Count
2N
4N
Normal Cell Cycle
1. 肿瘤的早期诊断。
2. 肿瘤的良恶性判断。
3. 观察细胞的增殖状态及周期分布。
4. 疗效监测
细胞功能分析


+或
CD8+分为介导细胞免疫的I型细胞和介导体液
免疫的II型细胞.


,聚集功能检测
树突状细胞分析(Dendritic Cells,DC)
DC是主要的抗原递呈细胞,同时又是重要的先天免疫细胞,还是具有免疫调控功能的一个细胞群,没有发现特异性的抗原标记
DC研究的主要内容包括直接分析计数、体外诱导检测,一般分为两群-PDC,MDC
当前DC检测的方法:
1)Lin-,CD11c,CD123,同时可能表达CD80,CD86,CD83,DR等
2)利用BDCA1,2,3,4对外周血或其它组织DC进行分析
3)CD14+16/CD85/CD33,CD14+16/CD85/CD123
T细胞分析
相对计数-淋巴细胞亚群数量检查项目和意义
疾病
CD3
CD4
CD8
CD4/CD8
NK
自身免疫病
降低
增高
降低
降低
AIDS
降低
严重降低
增高
降低
SARS
降低
降低
降低
降低
降低
慢性活动性肝炎、肝硬化
降低
正常或
增高
降低
降低
肿瘤
降低
降低
增高
降低
降低
CD4细胞绝对计数
对AIDS病人的诊断、疗效和预后有重要的指导意义,一般认为CUTOFF值为200/ul.
绝对计数是加入浓度已知的标准微球与标本一起测定,流式细胞仪控制软件在设置后能自动计算出浓度
对任何细胞群体都可以进行绝对计数
Th1Th2细胞因子分泌细胞测定
根据产生的细胞因子的类型和生物学功能,人的CD4+T细胞可以分为Th1、Th2
Th1细胞产生IL 2、IL 12、IFN γ、TNF β等细胞因子,主要参与细胞介导的免疫反应、迟发性过敏反应,并在清除病毒等细胞内致病因子方面起着重要作用
Th2细胞分泌IL 4、IL 5、IL 6、IL 10、IL 13等细胞因子,主要促进体液免疫反应,中和胞外病原体
相应地,CD8+T细胞也可以分为Tc1和Tc2
Th1细胞:介导细胞免疫、细胞毒性T细胞的生长和活化、巨噬细胞的活化、介导迟发型过敏反应。其功能亢进将导致炎症慢性迁延,器官特异性自身免疫病,急性排异反应和接触性皮炎等的发病和免疫病理损伤。
Th2细胞 :介导体液免疫,促进B细胞的生长、活化和分化,是IgG1和IgE类抗体的转换因子,其功能亢进将导致特异性过敏反应,参与高IgE综合症和嗜酸性粒细胞增多症。