文档介绍：南开大学
硕士学位论文
耐热锰超氧化物歧化酶的表达纯化及其结构的研究
姓名:刘海燕
申请学位级别:硕士
专业:生物化学与分子生物学
指导教师:张耀洲
2012-05
摘要本实验室从中国农科院张志芳老师实验室获得一种耐热幕颍,编码霭被岵谢嗦氲牡鞍追肿恿吭げ馕鹊点预测为为了探索拿秆灾剩颐墙玀基因分别克隆到原核表达载体蚿中,成功构建重组质粒。将上述重组质粒转化甤璉盏℃泶锖螅ü┖蠓直鹞朐げ庵迪喾通过超氧化物歧化酶测活试剂盒测得,和拿富罘直鹞为探索慕峁梗颐峭ü缀筒阄龅拇炕椒ǎ玫酱慷仍ヒ上的目的蛋白,测得甅和呐ǘ确直鹞/,通过悬滴法来点结晶,置于结晶室培养。通过一系列对结晶条件的摸索,确定甅并迳さ淖罴雅ǘ确直鹞/,ü占头治木迨荩呀玀的晶体结构完全解出,结果显示:该酶为单体,,鄣富钚灾行暮幸桓雒汤胱雍兔纠胱印为了探索哪腿然疲浣峁褂肴嗽碝的结构相比较,发现它们的蛋白质氨基酸序列有%相同和%的相似性。将两者三维结构的卦拥戏⑾—,通过低彻菇ㄖ刈椴《靖腥炯也螧细胞,通过鉴定,结果表明:耐热蚩梢栽贐细胞中成功表达,从而也得出蚩梢栽谡婧吮泶锵低持谐晒Ρ泶锏慕崧邸本课题证实了耐热谠撕驼婧吮泶锵低持卸伎梢员泶铮晒析出耐热木褰峁梗⒃谄浣峁购突钚灾行姆矫嬗肴嗽碝做关键词:锰超氧化物歧化酶,酶学活性,晶体结构,全长为鉴定,上清和痬/和./和出了对比,对其耐热机制的后续研究奠定了基础。.
.妫甌/.,.,...痬痬瑃%/.,/.,.,瓼疭..甶瑀甴·甌
篗,疭,.,.,珺
符号说明超氧化物歧化酶锰超氧化物歧化酶带有昵┑腗融合蛋白可以切除昵┑
第一章绪论第一节攀幕靖拍睦嘈秃头植巧锾迥诳梢郧宄跻趵胱幼杂苫囊恢置浮緇陨锾逭常的生命活动起着重要的作用。惴捍嬖谟谧匀唤绲亩铩⒅参镆约耙恍微生物中,作为抗氧化酶类主要成员之一,能有效地清除对机体有害的超氧自由基’,因此在防护自由基的损伤方面中起到非常重要的作用【。币彩强寡趸鹕说慕鹗裘福牖蹇顾ダ稀⒎乐怪琢龇⑸头阑辐射伤害等都有一定关系【俊V两瘢ü鞴蒲泄ぷ髡呤甑呐Γ赟的基础领域研究中已取得了瞩目的成果,包括奈锢砘灾省⒎肿咏峁埂类型、分布和活性测定等方面。随着科学研究进一步的加深,相信其会更加广泛的应用于医药、食品和化妆品等领域。且焕嗲宄齇‘墓丶鹗裘福孕柩跎锾宸烙醵拘云鹱殴丶缘作用。基于岷系慕鹗衾胱硬煌颐强山浞治H啵篊/虵I鲜兰甏琄等从链霉菌菌株中分离得到另一种一般而言,饕4嬖谟诮显嫉纳锢嗳褐校昀捶⑾郑恍┱婧藻类和某些高等植物省⒎选⒁印⒂筒说体内也存在;是在∩辖吹囊恢纸鹗舻鞍酌福饕4嬖谟谠讼赴驼婧嘶质中,如人的线粒体、肝脏细胞以及某些植物的叶绿体中都存在一定的浚籆/姆植冀瞎悖饕4嬖谟谡婧讼赴南赴手校缍新的襊物的血液和肝脏,以及豌豆和刺梨等植物种中都存在一定的痁除了以上四种琒甇等又从甤蟹⑾至艘恢趾刑.
姆肿咏峁购托灾诓煌煊蛑械挠τ和锌的新型碏/K隢都为为四聚体结构,且二者之间不会发生免疫交叉反应【俊姆肿咏峁从一级结构上来说,不同的硐治R欢ǖ南嗤曰蛳嗨菩訹。从高级结构上来说,梢苑治A阶澹篊/5谝蛔澹琈和为第二族。痁结构一般由由鲅腔钩桑浠钚灾行氖且桓霾还嬖虻乃方锥结构,它是通过位于“口袋”底部的与四个谢鸵桓鯤配位而形成不同来源的虵的分子结构都具有较高的同源性,参与构成活性中心的金属离子和氨基酸一般都是高度保守的【”】,它们的活性中心都含有保守的鯤残基和谢从虢鹗衾胱咏岷希约發,最终形成“,,的保守结构男灾且恢忠兹苡谒闹兴嵝缘鞍祝话憔哂薪细叩哪腿取⒛退峒畹刃灾省由于械姆羌园被崾拷仙伲贾耂在生物体内的半衰期一般都比较短。一般而言,痁对氰化物非常敏感,而虵对氰化物却不敏感。可以还原,痁和璈な奔浯砗笫此外,由于薪隙嗟腡和缓珻,紫外吸收光谱的最大吸收峰出现在附近,而痁含有牧拷系停淖畲笞外光吸是附近,而不是在浇目前,越来越多的国内外学者着力于难芯浚芯糠段婕暗缴铮医药,化学,化妆品和食品等领域。据报道,科学家己在在闹票浮⒖顾的活,而皇蹾挠跋臁第一章绪论..。
第二节耐热蛋白的研究进展及意义墓谕庋芯拷老、防辐射、抗炎和抵御自身免疫性疾病等方面已取得较大进展俊在临床医学上,梢杂美粗瘟蒲字ⅰ⒉《拘约膊『妥陨砻庖咝约膊〉燃病,具有抗衰老、抗辐射、抗癌和防止皮肤色素沉着的作用【虼耍琒的活性降低常被作为一种诊断是否患有某些疾病的判断依据【俊T诹俅惨窖希多种药用驯皇褂茫瘟频募膊∫话愣加牖钚匝跛鹕讼喙亍在食品工业中,梢宰魑6嘀质称返目寡趸粒被箍梢宰魑J卟和水果的保鲜剂们。此外,有相关的研究表明,制成的侍寰哂幸韵伦