文档介绍：山西医科大学
硕士学位论文
三氧化二砷和顺铂诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的作用研究
姓名:嵇静
申请学位级别:硕士
专业:卫生毒理学
指导教师:裴秋玲
20090216
三氧化二砷和顺铂诱导人肝癌细胞凋亡的作用研究要摘研究三氧化二砷和顺铂联合应用对人肝癌赴甑蛲龅挠盏作用,并且深入探讨其作用机制,从而为将三氧化二砷和顺铂联合应用于临床治疗肝癌提供更坚实的实验基础和理论依据,为肝癌的化学药物治疗探索出一条新的途径。肕法倪蚶侗壬ǚ检测经不同浓度的。:虲砉娜烁伟〩细胞株的吸光度值,计算细胞生长抑制率,并且绘制随药物浓度变化的细胞生长抑制曲线;同时通过计算两药相互作用系数雌兰哿街忠┪锏南嗷プ饔眯灾省圆煌ǘ鹊腁。和对人肝癌赴写恚肁疎ü馊旧法观测肝癌细胞随药物剂量一时间变化的凋亡情况,形态学变化,并且计算药物诱导细胞凋。和单独及联合使用对肝癌赴直鸾写恚捎眉从眯头巧物素免疫组化检测方法,结合计算机图像分析,检测珺,蛋白在肝癌细胞中的表达情况。捎昧魇较赴羌际酰鄄旌头治鼍鼳篛。和两种药物处理后的人肝癌细胞株的细胞周期变化情况,以及细胞凋亡率。枚肆V馗蠢┰鍪笛际踅岷戏潜湫跃郾0纺旱缬疽痉ǎ定人肝癌赴昃鼳。和两种药物单用及联用不同时间后端粒酶活性的变化情况。甇/和甇/ビ靡┘傲:嫌靡┳榫梢砸种迫烁伟〩细胞株的生长,并且具有明显的剂量一时效关系;同时观测到各联合用药组对肝癌细胞的抑制率均较各相应的单独用药组显著增强,其中低浓度联合用药组的抑制率增加更为明显:中低浓度的:肛痬与.“/:嫌τ枚匀烁伟〩细胞作用保赴种坡史直鹞#ィィィ蛔饔时,细胞抑制率分别为:.%,.%,.;作用保赴种坡史直鹞#ィィァ赴翁У母谋洌涸谟ü庀晕⒕迪拢梢怨鄄斓蕉哉兆橄赴氏置稚⒍的荧光,而经过。和共同处理过的细胞则出现大量典型的凋亡细胞,凋亡细胞内目的:方法:亡率。结果:煌ǘ鹊腁/、癵/和癵/虲痬./、西医科人学博上学位论文
可见到明显的核碎裂现象,并且其核内可见染色浓度改变的颗粒状荧光。计算鱿赴的细胞凋亡率,结果显示:细胞凋亡率变化具有一定的剂量一时效性;单独使用:嘎低浓度组痬与对照组比较差异没有显著意义.,:虲:嫌靡┳椋谝┪锱ǘ冉系褪凋亡细胞的比例就已经很高。虲匀烁伟细胞株的与只虮泶镉跋斓研究表明,两种药物作用的浓度和时间与这三种基因的表达有密切的关系。低浓度:.痬和.“痬在早期纯梢允拐馊只虻谋泶锓⑸浠但并不十分明显。随着药物浓度增加以及作用时间延长,基因的表达发生较明显的变化:实验组肝癌细胞的虵基因的表达明显增加,虻谋泶锩飨越档停哉组肝癌细胞基因表达增加,現基因的表达率较低。同时通过研究发现:和两药合用组对三种基因表达的影响要强于两药单独用药组,┳樵贒组方图上均可见在F细胞前凋亡细胞呈现典型特征性的亚二倍体凋亡峰。峰,即峰一联合用药组的凋亡数值要高于各单独用药组,由此可以说明::虲杏盏几伟┫胞凋亡的作用,两药联合应用时诱导细胞凋亡的作用大大增强,并且可以使谙赴跎伲将细胞生长周期阻滞于#疢期。ü肆C富钚缘募觳夥⑾郑珹虲街忠┪锏ビ眉傲S米樽饔时,人肝癌赴亩肆C讣觳饨峁Q粜裕蛔饔时,各单药组端粒酶检测仍然为阳性,联合用药组的端粒酶活性则有一定程度的抑制;各单独用药组作用蠖肆C讣觳结果还为阳性,而联合用药组作用蠖肆C讣觳庠蛭R跣浴S纱丝梢运得鳎:嫌靡组胁荒茏瓒隙肆C傅幕钚裕湓蚩赡芪R┪锱ǘ冉系停饔檬奔浣隙蹋辉时则可以部分阻断端粒酶活性,但作用蠹纯梢酝耆瓒隙肆C富钚裕啾冉细鞯ザ烙药组阻断端粒酶活性的作用均明显增强,可见这两种药物阻断端粒酶活性的作用具有一定的剂量一时效性,随着药物浓度提高和作用时间延长其抑制作用增强。结论:臼笛橹っ鳎谔逋釧虲街忠┪锪:嫌τ镁哂忻飨缘男垢伟┳饔茫可以显著抑制人肝癌赴甑纳ぃ⑶揖哂忻飨缘募亮恳皇毙Ч叵怠虲街忠┪锪:嫌τ靡种迫烁伟┫赴さ淖饔迷谟谄溲≡裥杂盏几癌细胞的凋亡,且联合用药组的诱导凋亡率明显高于各单独用药组,说明两药联用有显著的协同诱导肝癌细胞凋亡的作用。在药物浓度方面,如果将本实验中联合组所用浓度再降低一些,是否亦能获得与单独用药时相当或更好的疗效,还有待进一步验证。浩呛虲街忠┪镉盏几伟┫赴蛲龅淖饔糜隑,現基因的表达改变有关,其增强了促进凋亡基因現的表达,下调了抑制凋亡基因的表达,山西医科大学博二学位论文
隑的比例减少,这是其诱导肝癌细胞凋亡的重要分子机制之一。。和两种药物联合应用可以改变肝癌细胞周期,使人肝癌细胞谙赴减少,将细胞生长周期阻滞于海疢期,阻止细胞的有丝分裂,从而延长细胞周期时间,这亦是其诱导肝癌细胞凋亡的重要机制之一。。和联合应用增强了抑制端粒酶活性的作用,从而抑制了肝癌细胞的生长,而端粒酶表达的抑