文档介绍：质粒DNA的提取和鉴定
实验一
1
可编辑版
一、目的与要求

“过柱”快提质粒DNA
2
可编辑版
二、相关知识及原理
质粒(Plasmid) ：
独立于染色体外的，能自主复制且稳定遗传的遗传因子。
是一种环状的双链DNA分子。
存在于细菌、放线菌、真菌以及一些动植物细胞中，在细菌细胞中最多。
3
可编辑版
质　粒（plasmid）
是染色体外小型（1-200kb）的共价、闭合、环状的双链DNA分子（cccDNA），能自主复制并能稳定遗传的遗传因子。
常常编码一些对宿主有利的酶的基因，这些基因的表型包括抗生素抗性、产生抗生素、限制酶、修饰酶等
质粒的复制：严紧型复制（1～n个）
　　　　　　　松弛型复制（20个以上）
4
可编辑版
细菌质粒:
细菌质粒是用的最多的质粒类群，其大小从1Kb-200Kb，它们复制时利用宿主细胞复制自身基因组DNA的同一组酶系。
5
可编辑版
DNA超螺旋结构
6
可编辑版
常用的质粒载体
是通过DNA重组技术构建而成的。pUC18, pUC19
7
可编辑版
Insert
EcoRI
XhoI

8
可编辑版
严谨型：这些质粒的复制是在寄主细胞严格控制之下的，与寄主细胞的复制偶联同步。所以，往往在一个细胞中只有一份或几份拷贝；
松驰型：这些质粒的复制是在寄主细胞的松弛控制之下的，每个细胞中含有10-200份拷贝，如果用一定的药物处理抑制寄主蛋白质的合成才会使质粒拷贝数增至几千份。如较早的质粒pBR322即属于松弛型质粒，要经过氯霉素处理才能达到更高拷贝数。
质粒类型：
9
可编辑版
质粒是携带外源基因进入细菌中扩增或表达的主要载体，它在基因操作中具有重要作用。质粒的分离与提取是最常用、最基本的实验技术。
载体(Vector)：
用于携带重组DNA，并且能够使外源DNA一起复制与表达的质粒(运载工具)。
10
可编辑版