文档介绍：血清免疫球蛋白IgG提取
实验目的
掌握盐析法提取血清免疫球蛋白IgG抗体的原理
熟悉血清IgG提取纯化操作过程和方法
二、实验原理
蛋白质在不同浓度的盐溶液中相对溶解度不同，它在一定浓度的中性盐溶液中易于沉淀，而其他蛋白质组分在此时不易沉淀，通过离心可将两者分离。
透析法脱盐:
透析是将含有小分子杂质的蛋白质溶液装在半透膜（玻璃纸、火绵纸等）制的透析袋里放在透析缓冲液中进行，可不断更换缓冲液，直至杂质被除去
四、操作步骤
室温静置30min,
4℃离心，4000rpm,10min
上清液（β球蛋白）
沉淀为γ球蛋白
紫外分光光度计测定蛋白含量
沉淀溶于1mL生理盐水
移入透析袋，充分透析，
沉淀溶于1mL生理盐水,

弃去上清液（含清蛋白）
弃去上清液（α、β球蛋白）
沉淀溶于1mL生理盐水,

室温静置30min,
4℃离心， 4000rpm,10min
1mL血清＋1mL生理盐水
滴加饱和硫酸铵溶液2mL
室温静置30min,
4℃离心， 4000rpm,10min
五、结果判断
分别测OD280和OD260处的光密度值，按照公式计算
蛋白质浓度（mg/ml）= — OD260
IgG正常参考值：8．00～16．00g／L
效价可用免疫双扩散试验判断；
特异性则可通过双扩、免疫电泳或交叉凝集试验进行考察；
浓度也可通过免疫浊度法等检测。
六、注意事项
盐的饱和度：影响盐析的重要因素，不同蛋白质的盐析要求盐的饱和度不同
pH值：在等电点时，蛋白质溶解度最小越易沉淀析出。
蛋白质浓度：越大越易沉淀，使用盐的饱和度的极限愈低。过高也易引起其他杂蛋白共沉。
温度：一般可在室温下进行，某些对热特别敏感的酶，则宜低温。
脱盐：透析时间较长，常在低温下进行，并加入防腐剂避免变性或微生物的污染。
饱和硫酸铵溶液的滴加方式：逐滴，搅拌
盐析后放置时间、离心操作的速度、时间
透析袋的使用
七、方法学评价
硫酸铵水中溶解度高，受温度影响小，不易使蛋白质变性，操作简单，为盐析中常用的中性盐
硫酸铵中含有氮，会干扰蛋白质的测定，且溶液的缓冲能力差，故多用于大量蛋白的粗提。若要获得纯化的免疫球蛋白，必须经过凝胶过滤、离子交换层析和亲和层析进一步提纯
八、思考题
透析缓冲液与洗涤液有什么不同?