文档介绍：IH复习提纲
一、课程性质及特点
免疫组织化学是一门研究利用核素或非核素标记物作为显示手段,并借助免疫化学或亲合化学的专一性和高灵敏性,原位示踪组织或细胞中的抗原或抗体的应用科学,是一项敏感、特异的原位示踪染色技术。
特点:特异、敏感(ng或pg水平),原位、形态-机能-代谢三位一体。
二、技术类型
IH的技术类型多样,彼此通用,各有特点。
(1)以标记物种类分:放射免疫自显影,免疫荧光、免疫酶标、亲合免疫酶标、络合放大免疫酶标(CSA 、 Epos 、 EnVision 、 UIP) 、免疫重金属标记(胶体金、铁蛋白)等。
(2)以标记物交联特点分:标记抗体(直接法和间接法)、不标记抗体(桥法和复合物法)。
(3)以显示敏感度分;单标记、重复标记(双PAP、PAP-ABC法等)、网络标记(EnVision、CSA法等)。
目前应用较广且较为敏感的技术有PAP、S-P、sABC、IGSS(间接法)和EnVision法等。
一般来说,免疫光镜多采用S-P(间接法)、sABC法-HPO、IGSS法(间接法)和EnVision(间接法);免疫电镜多采用IGS法(间接--包埋后)。
三、免疫试剂
IH的关键试剂为抗体:计有特异性抗体(第一抗体-示踪试剂)、桥连抗体(第二抗体-放大试剂)和标记抗体(第三抗体、-显示试剂)等。目前商品化的各种抗体试剂多为鼠系单克隆抗体,应用中必需注意种系匹配和免疫学亲和对应原理。
四、组织处理和切片选择
免疫组织化学中组织处理的原则是“保留抗原、维护结构”;操作中注意“及时固定、温和短时”;“石蜡优先,冰冻跟上”;“暴露决定簇,阻断内源干扰”。
常用于石蜡包埋组织固定剂有:10%中性甲醛、4%缓冲多聚甲醛、PLP液等。
载玻片做到清洁、无尘、防脱片(预涂粘片白胶-10%%或3-氨丙基三乙氧硅烷2%)。
▲五、方法原理与选择根据
免疫组化染色方法类型众多,基本原理大同小异,但由于标记交联显示方法的不同,其技术的检测敏感性上存在某些差异,可按工作实际与实验室条件,加以选用。
目前文献中仍以酶标记应用报道最多,尤其是与亲合物的结合。例如LsAB-HPO间接法(或称SP 间接法),sABC-HPO法,LsAB-AKP法, sABC -AKP法,其次是PAP法或APAAP法,IGSS间接法。
免疫荧光间接法尚有一定应用价值,仍可见于诸文献报道。免疫胶体金间接法(5nm或10nm)主要应用于免疫电镜。
新近,为了适应快速IH诊断的需要,采用高分子葡聚糖作交联载件,预先连接标记酶和抗体,组成巨大免疫示踪试剂分子,使免疫组化染色操作流程大大简化和标准化,并由于检测复合物的分子量的增大而进一步提高了方法的灵敏度。该类增敏放大方法有多种,其中以EnVision法的应用报道最多,并已有商品试剂供应。