流式细胞仪操作规程.doc

文档介绍：流式细胞仪的使用程序
------分子病毒实验室

检查稳压器电源,打开电源,稳定5分钟。
打开储液箱,倒掉废液, 并在废液桶中加入400ml漂白水原液。打开压力阀,取出鞘液桶,将鞘液桶加至4/5满(一般可用三蒸水,做分选必须用PBS或FACSFlow),合上压力阀。确实盖紧桶盖,检查所有管路是否妥善安置。
将FACSCalibur开关打开,此时仪器功能控制钮的显示应是STANDBY,预热5-10分钟。排出过滤器内的气泡。
如果需要打印,打开打印机电源。
打开电脑,等待屏幕显示出标准的苹果标志。
执行仪器PRIME功能一次,以排除Flow cell中的气泡。
分析样品时,先用FACAFlow 或PBS进行HIGH RUN约2分钟。
X。做过分选后,每次开机后需冲洗管道:向分选装置上装上两个50ml离心管,不接通浓缩系统,摁下右下角白色按钮开始冲洗。待自动停止后接通浓缩装置,同上法冲洗一次。
预设获取模式文件(Acquisition Template Files)
从苹果标志中选择CELLQuest见一个新视窗,可利用此视窗编辑一个获取模式文件。
选取屏幕左列绘图工具中的Dot plot,绘出一个或多个Dot Plots(点图)。从Dot Plot对话框中选取Acquisition作为图形资料来源,并确定适当的x轴和y轴参数。
选取屏幕左列绘图工具中的Histogram,同上法可绘出Histogram(直方图)。
将此视窗命名后储存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuest Folder \EXP文件夹中,下次进行相同实验时可直接调用。
X. 本计算机中已设定两个模式文件:ACQ和EXP,储存于FACStation G3\BD Applications \CELLQuest \EXP文件夹中,ACQ用于细胞DNA检测,EXP用于细胞表面标志分析。
用CELLQuest进行仪器的设定和调整
从苹果画面中选取CELLQuest,进入CELLQuest后在File指令栏中打开合适的获取模式文件。
从屏幕上方Acquire指令栏中,选取Connect to Cytometer(快捷键:+B)进行电脑和仪器的连机。将出现的Acquisiton Control对话框移至合适位置。
从Cytometer指令栏中,开启Detectors/Amps、pensation、Status等四个对话框,并将它们移至屏幕右方,以便获取数据时随时调整获取条件。也可以用+1,2,3,4获得此四个对话框。
在Detectors/Amps对话框中,先为每个参数选择适当的倍增模式(amplifier mode):线性模式Lin或对数模式Log。一般进行细胞表面抗原分析如分析外周血的淋巴细胞亚群时,FSC和SSC多以线性模式Lin测量,且DDM Param选择FL2,而FL1, FL2与FL3则以对数模式Log测量;分析细胞DNA含量时,FSC,SSC,FL1,FL2,FL3皆以Lin进行测量,且DDM Param选择FL2;分析血小板表型时,FSC,SSC,FL1,FL2,FL3等均以Log进行测量。
放上待检测的样品,将流式细胞仪设定于RUN,流速可在HIGH 或LOW上。
在Acquis