文档介绍：平板划线分离
试验六 平板划线法分离菌种
一、试验目标
1、了解平板划线法分离菌种的基础原理
2、练板划线法分离菌种的基础操作，掌握无菌操作技术
二、试验原理
平板划线法是指把杂菌样品经过在平板表面划线稀释而取得单菌落的方法。通常是将混杂在一起的不一样种微生物或同种微生物群体中的不一样细胞，经过在分区的平板表面上作数次划线稀释，形成较多的独立分布的单个细胞，经培养而繁殖成相互独立的多个单菌落。通常认为这种单菌落就是某微生物的“纯种”。实际上同种微生物数个细胞在一起经过繁殖也可形成一个单菌落，故在科学研究中，尤其是在菌种判定等工作中，必需对试验菌种的单菌落进行数次划线分离，才可取得可靠的纯种。
对细菌、酵母菌较为适宜，而霉菌和放线菌的分离多采取稀释分离法进行菌种的分离纯化。
详细的划线形式有多个，这里仅介绍一个经过长久实践并证实可取得良好试验效果的方法：将一个平板分成A、B、C、D4个面积不一样的小区进行划线，A区面积最小，作为待分离菌的菌源区，B和C区为经初步划线稀释的过渡区，D区则是关键的单菌落收获区，它的面积最大，出现单菌落的概率也最高。由此可知，这4个区的面积安排应做到D>C>B>A。 判别培养基是在培养基中加入某种试剂或化学药品，使难以区分的微生物经培养后展现出显著差异，因此有利于快速判别某种微生物。这么的培养基称之为判别培养基。比如用以检验饮水和乳品中是否含有肠道致病菌的伊红美蓝培养基就是一个常见的判别性培养基。 其配方中含有乳糖、伊红和美蓝，用以判别肠道病原菌及其它杂菌。伊红、美蓝作为指示剂，伊红系酸性染料，当大肠埃希氏菌或产气肠杆菌分解乳糖产酸时，因为细菌带正电荷，因此被伊红着色。在大肠埃希氏菌中因为伊红和美蓝结合，因此菌落不呈红色，而是蓝紫黑色，且含有绿色金属光泽；菌落呈棕色者为产气肠杆菌；不分解乳糖的肠道病原菌则不着色，有时因产生碱性物质较多，细菌带负电荷，被美蓝着色后，菌落并不呈蓝色，因美蓝和伊红结合，因此菌落为淡紫色。
三、材料和器皿
1、菌种：大肠埃希氏菌和枯草芽孢杆菌的混合培养斜面菌种。
2、培养基：伊红美蓝琼脂培养基。
3、器皿：无菌培养皿，水浴锅，接种环，培养箱等。
四、试验步骤
1、融化培养基
将装有伊红美蓝琼脂培养基的三角瓶放入热水浴中加热至沸，直至充足融化。
2、倒平板
待培养基冷却至50℃左右后，按无菌操作法倒平板，平置，待凝。 操作方法：右手持盛培养基的三角瓶置火焰旁边，用右手手掌和小指将瓶塞轻轻地拨出，瓶口保持对着火焰；然后左手拿培养皿并将皿盖在火焰周围打开一条稍大于瓶口的缝隙，快速倒入培养基约15ml，加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布在培养皿底部，然后平置于桌面上，待凝后即为平板。
3、作分区标志
在皿底用记号划分成4个不一样面积的区域，使A
图1 平板分区、线条和划线操作示范示意图
4、划线操作
1)挑取菌样：选取平整、圆滑的接种环，按无菌操作法挑取少许含菌试样。
2)先划A区：将平板倒置于酒精灯火焰旁，用左手取出平板的皿底，使平板表面大致垂直于桌面，并让平板面向火焰。右手持含菌的接种环，先在A区轻巧地划3~4条连续的平行线看成初步稀释的