文档介绍：生物化学与分子生物学实验原理(I)-蛋白质的分离纯化
高效液相-HPLC (High-Performance Liquid Chromatigraphy)
介质一般为在高压下稳定的衍生化硅胶,颗粒小(1-10 μm),可提高理论塔板数到10万/m。
要求有较自动的进样装置,高压泵,和预装住。
有较自动的商品化的系统供应
高压、高速、高分辨率、高灵敏度
ÄKTA FPLC
The principle of chromatography
Question 1 : How chemically pounds can be separated in a chromatographic column?
保留时间
从进样开始到达检测器所需要的时间.
在峰尖的位置测量
影响 tR 的因素有:
流动相的线形流速
色谱保留
色谱保留
被分析物(样品成份) 在两相之间的平衡
Amobile Astationary
用来衡量色谱峰宽度的参数,有三种表示方法:
(ⅰ) Standard deviation标准偏差():。
(ⅱ) The half-band width半峰宽(Y1/2):色谱峰高一半处的宽度 Y1/2 =
(ⅲ) The base-line width峰底宽(Wb):Wb=4
塔板理论Plate theory
将色谱假设为一个蒸馏塔,塔内有许多块塔板,样品各组分在每块塔板的液相和固相间进行分配.