文档介绍：第第44章章原代细胞的培养与建系原代细胞的培养与建系
凡是来源于胚胎、组织器官及外周
血,经特殊分离方法制备而来的原
初培养的细胞称之为原代细胞。
细胞的纯化或细胞克隆技术是细胞
培养工作的基础。
第一节第一节原代细胞的取材原代细胞的取材
•人和动物细胞的取材是原代细胞培养
成功的首要条件,直接影响细胞的体
外培养。
一、取材的基本要求一、取材的基本要求
•
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• 、分化程度、年龄等
•
二、各类组织的取材技术二、各类组织的取材技术
皮肤和粘膜的取材
内脏和实体瘤的取材
血液细胞的取材
骨髓、羊水、胸/腹水细胞取材
动物组织取材
人胚体组织取材
鸡(鸭)鸟类胚胎组织取材鸡(鸭)鸟类胚胎组织取材
皮肤和粘膜的取材皮肤和粘膜的取材
•主要取自于手术过程中的皮片,方法
似外科取断层皮片手术操作,但面积
一般2~4平方厘米。
内脏和实体瘤的取材内脏和实体瘤的取材
•内脏除消化道外基本是无菌的,但取
材时要明确和熟悉所需组织的类型和
部位,实体瘤取材时要取肿瘤细胞丰
富的区域,要避开破溃、坏死液化部
分,以防污染,尽量去除混杂的结缔
组织。
血液细胞的取材血液细胞的取材
•血细胞、淋巴细胞的取材,一般多抽
取静脉外周血,或从淋巴组织中(如
脾、扁桃体、胸腺、淋巴结等)分离
细胞,取材时应注意抗凝。
骨髓、羊水、胸骨髓、羊水、胸//腹水细胞取材腹水细胞取材
•严格无菌,注意抗凝,还要尽快分离
培养,离心后,用无钙、镁PBS洗两
次,再用培养液洗一次后即可培养,
不宜低温存放。
动物组织取材动物组织取材
• 1、鼠胚组织取材
•首先用引颈或气管窒息致死法处死孕期合适的
动物,然后将其整个浸泡在含有75%酒精的烧
杯中,5分钟后(注意时间不能太长,以避免
酒精从口或其他通道进入体内,影响组织活
力),取出动物,在消毒过的木板上可用无菌
的图钉或大头针固定四肢,切开皮肤,用无菌
操作法解剖取胚或用无菌止血钳挟起皮肤、用
无菌眼科剪沿躯干中部环形剪开皮肤,用止血
钳分别挟住两侧皮肤拉向头尾,把动物反包,
暴露躯干,然后再固定,更换无菌解剖器材,
采用无菌操作法解剖取出胚胎。
• 2、幼鼠胚肾(或肺)取材
•幼鼠采用上述方法处死消毒后,腹部
朝上固定在木板上,先切开游离毛皮
并拉开至两侧:然后采用无菌法打开
胸腔取肺,或背部朝上固定在木板
上,先将背部毛皮切开游离并拉向两
侧,然后采用无菌法从背部打开腹腔
取肾。