文档介绍：答辩委员会主席答辩委员会成员林东军教授许多荣教授陈伟教授余妙容副教授王春燕副教授论文评阅人李春富教授肖扬教授谢强副教授年耹广州
同种异体骨髓间充质干细胞输注治疗大鼠辐射损伤硕士研究生:蒋玲郭坤元教授摘要指导导师:背景与目的放射治疗是肿瘤治疗中的一项重要手段,随着肿瘤发病率的增高,放射治疗的应用相对以往明显增加,随之出现的放射性损伤也相应增多。自年伦琴发现湎撸约坝恕⒗氐认嗉谭⑾郑铱A巳死嗬玫缋敕涞男蚰弧H而,电离辐射却是一把双刃剑,它也会对人体健康造成一定的危害。辐射损伤是由于辐射能作用于机体后引起体内一系列的变化,当损伤严重时可使组织器官发生不可逆的破坏甚至导致机体死亡。国内外学者对于辐射损伤的氧自由基学说较为肯定,氧自由基的产生和清除保持一个动态的平衡,辐射损伤可生成大量自由基,引发脂质发生氧化反应,导致细胞膜破坏和细胞死亡,继而引起体内抗氧化物质活力的变化,。超氧化物歧化酶琒翘迥谥匾5淖杂苫宄粒诨宓难趸与抗氧化平衡中发挥重要的作用,能清除自由基,保护细胞膜免受氧化和脂质过氧化损伤。丙二醛,是自由基攻击生物膜引发脂质过氧化的产物,可与蛋白、核酸、和磷脂等含有氨基的物质交联,引起这些大分子化合物的分子交联。因此娇煞从郴迥谥使趸的程度,其在血液的水平可间接反映细胞损伤的程度。本实验研究观察指标之一就是间充质干细胞琈移植后能否改变大鼠体内硕士学位论文
实验方法第二部分治疗辐射损伤效果的研究第一部分大鼠间充质干细胞的体外培养与鉴定氧自由基水平。肾脏、睾丸、肺脏、肝脏等机体脏器属于放射高敏感性器官,容易受到辐射损伤,出现器官功能障碍,影响机体代谢、解毒、分解等,最终导致生命危害。本研究模拟临床放射治疗的辐射模式建造损伤模型,并检测相应脏器的功能指标,探索辐射损伤后各脏器结构、功能的变化以及干预治疗的效果。是中胚层来源的具有多向分化能力的干细胞,国内外研究发现能够在特定条件下分化为骨细胞、软骨细胞、神经细胞等;是组织工程、细胞及基因治疗理想的靶细胞。它不仅取材方便、培养容易、增殖较快,而且具有多向分化潜能,免疫原性也较低的特点,低表达提示在进行同种异体间输注时,不会产生排斥反应。目前对于辐射损伤的治疗仅仅停留在调节、改善的水平上,未能从根本上解决问题。本实验立题基于这些特性进行干预治疗,采用同种异基因进行输注,研究在辐射损伤大鼠体内修复和改善受损脏器结构和实验在无菌条件下分离大鼠肱骨、股骨和胫骨,用撼逡撼宄龉撬瑁心后接种含%,按痗密度接种于培养瓶中,置于孵箱中培养。蟀肓炕灰海谖逄烊炕灰海赴ぶ.%融合时,ヒ让赶ù5怪孟晕⒕倒鄄煜赴翁魇较赴踅行细胞周期分析,用流式细胞仪检测细胞表面抗原、、及的表达,进行细胞鉴定,从而为本实验提供大量的同种异基因大鼠骨髓间充质选取只雄性大鼠随机分为三组,即对照组、模型组和治疗组。模型组摘要筒槐泶颩功能。干细胞。▲
统计学方法结果第一部分大鼠间充质干细胞的培养与鉴定珻、尿素琔、丙氨酸氨基转移酶、天冬门氨酸氨基转移酶,、乳酸脱氢酶琇⒓钚粤姿崦珹柏酮琓乃剑徊捎昧虼捅韧姿岷突凄堰恃趸ǚ直鸺觳庋G搴透个组织中亢蚐活性;制作各个组织常规石蜡切片,观察三组大鼠各个组织结构的差异,从功能学水平,生化水平及细胞形态学水平研究是否具有治疗辐射损伤的作用。实验资料结果用均数标准差桓表示,;重复测量数据用重复测量方差分析蛔榧淞搅较灾员冉戏讲钇氩捎肔法,方差不齐用相关性采用偏相关分析①本实验分离的骨髓间充质干细胞于筇谏ぃ×炕灰汉罂杉赴星形、多边形和不规则形;天左右时,细胞即可融合近%。传代培养后细胞形态基本上趋于一致,光镜下见细胞呈梭形,核圆,位于细胞中央,胞质肥大,胞膜清晰;②流式细胞术证明诘南赴颊ヒ陨希得鱉谔逋饩哂兄辉鲋,。
第二部分移植治疗辐射损伤效果的研究不分化的特点;③经流式细胞仪检测,砑治觯峁允镜代的特异性表面标志物:././疌,⒀粜月饰%,<涑渲矢上赴①观察大鼠的一般状态:对照组大鼠精神状态好,活动自如;模型组大鼠精神萎靡,反应迟钝,活动少,嗜睡,毛发变黄;治疗组大鼠精神状态一般,毛发微黄,反应较模型组灵敏。②全自动生化分析仪检测血清巾肌酐和尿素的含量,结果显示:对照组、模型组及治疗组血清中尿素含量分别为.、..、.±’法进行多重比较,稻钜炀哂型臣蒲б庖濉<◆糠直鹞..、../,检验方差齐,,;采用ń凶榧淞搅奖冉希琍值均.,差异具有统计学意③伞自动生化分析仪检测血清中、癓的含量,结果显示:对照组、模型组及治疗组血清中暮糠直鹞.、.±.疞:检验方差齐,,.徊捎肔法进行组间两两比较,稻钜炀哂型臣蒲б庖濉的含量分别为.±.、疞;检验方差齐,,义。暮糠直鹞