第六讲 分子生物学研究法（下）.pdf

文档介绍：第六章
分子生物学基本研究法
(下)基因功能研究技术
6. 1 基因表达研究技术
6. 1. 1 基因表达系列分析技术(Serial
Analysis of Gene Expression,SAGE)
是以DNA序列测定为基础分析全基因组表达

模式的技术。任何长度超过9-10个碱基的核

苷酸片段都可能代表一种特异性的转录产

物,因此,根据某个序列占总标签数的比例

可分析所对应基因的表达频率。
图6-1 常规SAGE方法
(short SAGE)基本
流程
LongSAGE技术
标签来自转录物3’端一段21bp的序列,可

以进行快速分析并与基因组序列数据相匹

配。其原理与ShortSAGE方法类似,只是

用了不同的IIS类标签酶(MmeI),并将程

序做了相应修改。
6. 1. 2 RNA的选择性剪接技术
RNA的选择性剪接是指用不同的剪接方式从

一个mRNA前体产生不同的mRNA剪接异构

体的过程。可分为:平衡剪切、5’选择性剪

切、3’选择性剪切、外显子遗漏型剪切及相

互排斥性剪切。常用RT-PCR法研究某个基

因是否存在选择性剪切。
图6-2 选择性剪切的不同类型
图6-3 RT-PCR检测5个拟南芥转录调控因子基因的选择性剪切
图6-4 果蝇(Drosophila melanogaster)的Dscam基因可
以通过可变剪接产生38000多种可能的mRNA异构体
6. 1. 3 原位杂交技术
原位杂交( In Situ Hybridization,ISH) 是

用标记的核酸探针,经放射自显影或非放射

检测体系,在组织、细胞、间期核及染色体

上对核酸进行定位和相对定量研究的一种手

段,分为RNA和染色体原位杂交两大类。
RNA原位杂交用放射性或非放射性(如地高

辛、生物素等)标记的特异性探针与被固定

的组织切片反应,若细胞中存在与探针互补

的mRNA分子,两者杂交产生双链RNA,可

通过放射性标记或经酶促免疫显色,对该基

因的表达产物做出定性定量分析。