文档介绍：分类号: S562 学校代码: 10758
密级: 公开学号: 1031020021
硕士学位论文
棉花 Bt 抗虫基因与 bar 抗除草剂基因的双价植
物表达载体的构建及转化的研究
Construction of plant expression vector containing insect resistant
Bt gene and herbicide resistant bar genes and research on
transformation of cotton
研究生姓名孟灵真
导师姓名及职称王希东副教授
合作导师姓名及职称曲延英教授
学位门类级别理学硕士
专业名称生物化学与分子生物学
研究方向棉花功能基因组研究
所在学院农学院
新疆·乌鲁木齐
二○一三年五月
独创性声明
本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得
的研究成果。尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中
不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得新疆农业大
学或其他教育单位的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对
本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。
研究生签名: 时间: 年月日
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研究生签名: 时间: 年月日
导师签名: 时间: 年月日
本文是国家转基因重大专项
“转基因长绒棉新品种培育”的部分研究成果
(项目编号:2011ZX0800500500—008)
课题主持人:曲延英
(新疆农业大学)
棉花 Bt 抗虫基因与 bar 抗除草剂基因的双价植物表达载体的构建
及转化的研究
摘要
棉花是重要的经济作物,但是由于棉花的生长长期受到虫害和杂草的侵害,就这两
项所造成的直接经济损失就占作物总产值的 10%~20%左右,因此棉花基因工程的发展
就大大促进了抗虫、抗除草剂以及抗逆等棉花品种的培育。
本研究利用 PCR 扩增出来的抗除草剂 bar 基因和实验室保存的抗虫 Bt 基因,成功
构建抗除草剂与抗虫双价植物表达载体 pBI121-bar/Bt。将植物表达载体 pBI121-bar/Bt
和 pBI121-Bt 分别转化至农杆菌工程菌菌株 LBA4404 中,并用转化后的农杆菌菌液,分
别侵染棉花新海 14、新海 16、新海 24 和新海 30 的胚性愈伤组织。对 pBI121-bar/Bt 转
化后的抗性愈伤组织进行了 PPT 浓度筛选,其浓度在 mg/L 时,胚性愈伤的生长良
好,同时筛选效果也明显;四种不同基因型胚性愈伤的生长情况中新海 24 的生长状态
最差,说明不同基因型对 PPT 的敏感性有差异。对转化后的头孢霉素浓度也进行了筛选,
结果表明:转化 pBI121-bar/Bt 基因的胚性愈伤在头孢霉素浓度为 800 mg/L 时,既能很
好地防止了农杆菌造成的污染,又能不抑制胚性愈伤的生长;转化 pBI121-Bt 基因的胚
性愈伤的有效头孢霉素浓度为 600 mg/L。说明转化不同基因后,胚性愈伤对抗生素的敏
感度有所不同。
转化 pBI121-bar/Bt 基因的不同棉花品种的胚性愈伤在 PPT 浓度为 3 mg/L,头孢霉
素浓度在 800 mg/L 时,新海 14 的胚性愈伤较其他品种出愈率最高,侵染后变黑程度较
轻;新海 24 的出愈率最低,侵染后变黑程度相对较严重。转化 Bt-4AB 基因的不同棉花
品种的胚性愈伤在 Kna 浓度为 50 mg/L,头孢霉素浓度在 600 mg/L 时,新海 16 的胚性
愈伤较其他品种出愈率最高,在农杆菌侵染后变黑程度较为最轻;新海 24 的生长情况
最差,变黑程度相对最严重;但胚性愈伤出愈率最低的是新海 30。
关键词:双价植物表达载体;抗虫;抗除草剂;遗传转化;PPT;头孢霉素;不同基
因型
I
Construction of plant expression vector containin