细胞培养：第九章 细胞培养在实验研究中的应用.ppt

文档介绍：第九章
细胞培养在实验
研究中的应用
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一、药物开发中的应用：
随细胞培养技术的发展，体外培养细胞已成为测试药物效应的常用对象，尤其适用于药物高通量筛选。
优点：1．直接应用人体细胞作为实验对象（用动物进行检测存在着物种上的差别，不同种动物对同一种药物的耐药性有很大差别）。2．如检测的药物具有组织特异性时，可选用相应的细胞，如治疗肝病的药物应选肝细胞，抗癌药物应选用癌细胞。
3．细胞生长在瓶皿中，加药后药物与细胞直接接触或直接注入细胞内，获得实验结果比较迅速，比动物经济。 4．结合使用多种方法技术检测药物效应，多方面揭示药物特性。
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注意：
体内外环境不同，体外实验时药物直接作用明显，在体内可能由于肝、肾等脏器对药物的修饰作用，使其作用增强或减弱。
有的药物在体外实验时无致癌性，进入体内后在某些酶的激活下可产生致癌作用，因此动物试验有必要性。
癌细胞的耐药性。
适用于单质药物测试，实验结果易于分析，但复方药或中药进行实验时，分析和评估实验结果应持谨慎态度。
被检药物需具有水溶性，若非水溶性药物测试时应有溶剂对照组，以排除溶剂作用。
尽量选取多种细胞类型，扩大检测范围。
总之，培养细胞比较适用于抗癌药的检测，常用于检测抗癌药和三致（致畸、致癌、致突变）等有害物。
（一）细胞选择
细胞选择不当，会影响实验结果的可信性和参考价值。1. 实验细胞选择原则 ① 药效不明时，对细胞的选择可不必十分严格，但为了解药物可能的作用，最好多选用几种类型的细胞进行。 ② 已知药物有特殊效应或欲求得对某一类细胞产生特定作用时，应尽量选用相应的细胞，如神经系统药物选用神经细胞，抗癌药用癌细胞。
③检测抗癌药物应根据药物抗癌谱选用细胞。药物无瘤种特异性时，可应用如HeLa、KB、BGC-823等各种细胞系或株。如有瘤种特异性时，则应根据抗癌作用要求选用上皮细胞起源的癌或中胚层起源的肉瘤细胞等。
总的原则是：药物与细胞种类的一致性或符合性越大越好，结果更具有参考价值。
2．对照细胞的选择
①  一般药物（非抗癌药）作用对象为正常细胞
实验组加药；
对照组不用药物，仅用药物溶剂处理
②  遗传缺陷调整药
作用对象为突变细胞
对照为相同类型的野生型细胞
③ 抗癌药：理论上应采用相应正常的二倍体细胞作为对照，但正常细胞只有成纤维细胞易于培养（适于检测肉瘤），而与癌相符的正常上皮细胞较难获得，不要说组织类型完全一致的（如胃癌与正常胃上皮细胞），即便是一般上皮细胞至今也极为缺少，可采用：
原代培养细胞：刚离体培养，性状与体内 细胞近似性大。
动物细胞培养：对细胞类型要求严格，且 不能用人成纤维细胞时。 注意 抗癌药物测试实验分组应注意： ① 实验组：加药的癌细胞； ② 对照组：不加药的癌细胞和
加药的正常细胞。
（二）检测药物 1. 药物的溶解和保存
水溶性药物，用不完全培养基或Hank’S液配制100×母液，用时按所需浓度进行稀释。
非水溶性药物，可以用DMSO或无水乙醇进行配制，要求在药物工作浓度下， %（V/V），这时不会对细胞产生毒性。
进行实验时，对照组要加入同等量的溶剂。
所配制的母液一般在–20℃保存，一些光敏药物还需避光保存。
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采用培养细胞进行药物检测，有时不能反应体内情况，有些药物经过肝脏后，会发生生物转化作用，可能会使原来没有毒性的药物产生毒性。
为弥补这一缺陷，可进行与体内环境比较相似的药物活化实验。采用大鼠或人的肝细胞活检材料和S9混合液在体外将药物活化。
受试药物和S9混合液与细胞接触时间一般为6h。
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