文档介绍：南华大学
硕士学位论文
Apelin促大鼠血管平滑肌细胞增殖的14-3-3—ERK1/2信号通路
研究
姓名:潘伟男
申请学位级别:硕士
专业:药理学
指导教师:陈临溪
20070501
原创性声明

本人声明,所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得
的研究成果。尽我所知,除了论文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中
不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得南华大学或其
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作者签名: 日期: 2007 年 5月 19 日

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作者签名: 导师签名: 日期: 2007 年 5月 19 日

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Apelin 促大鼠血管平滑肌细胞
增殖的 14-3-3— ERK1/2 信号通路研究
研究生:潘伟男
指导教师:陈临溪教授

摘要
目的: 研究 apelin-13 通过 PKC 和 14-3-3 蛋白对大鼠 VSMCs 增殖和磷酸化 ERK1/2 的影
响以及 14-3-3 与 Raf-1 之间的相互结合作用,探讨 apelin-APJ 系统的信号转导机
制。

方法: 组织贴块法培养大鼠胸主动脉 VSMCs;IF 明确 VSMCs 中 apelin 和 APJ 受体的定
位;WB 检测 14-3-3、pRaf-1、pERK1/2、ERK1/2、CyclinD1、CyclinE 和 Caveolin-1
的表达;MTT 观察 GF109203X 和 Difopein 对 apelin-13 促 VSMCs 增殖的影响;
IP 检测 14-3-3 和 Raf-1 等多蛋白高分子量复合物的形成。

结果: WB 实验结果显示,apelin-13 (0、、1、2、4µM)浓度依赖性刺激大鼠 VSMCs
14-3-3、pRaf-1 和 pERK1/2 表达增加,以 2µM 最为明显;2µM apelin-13 刺激大
鼠 VSMCs 14-3-3、pRaf-1 和 pERK1/2 表达呈时间依赖性改变,在 4h 增加最为显
著。PKC 阻断剂 GF109203X 和 14-3-3 蛋白抑制剂 Difopein 明显抑制 apelin-13 诱
导的 14-3-3、pRaf-1、pERK1/2、CyclinD1 及 CyclinE 表达,而且明显减弱了 apelin-13
对 Caveolin-1 表达的抑制作用,Caveolin-1 表达增加并与 pERK1/2 呈负相关。MTT
法显示 GF109203X 与 Difopein 明显抑制 apelin-13 诱导的细胞增殖。IP 发现
apelin-13 诱导 14-3-3 与 Raf-1 结合增加,而 GF109203X、Difopein 和 Caveolae 结
构破坏剂β-环糊精(β-cyclodextrin,β-CD)明显抑制两者结合。

结论: Apelin-13 通过 PKC-14-3-3/Raf-1 复合物-ERK1/2 信号转导通路促进大鼠血管平滑
肌细胞增殖。

关键词: Apelin-13;APJ;14-3-3;血管平滑肌细胞;ERK1/2;Raf-1;Caveolin-1
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14-3-3 protein is involved in ERK1/2 signaling transduction
pathway of rat VSMCs proliferation induced by apelin

【ABSTRACT】
AIM To investigate the effects of apelin-13 induced cell proliferation and activated
ERK1/2 function via PKC and 14-3-3 protein in rat VSMCs. Further to find new
signaling pathway of apelin-APJ.
METHODS VSMCs were prepared from male Sprague-Dawley rats’ t