文档介绍：HE技术操作规范
广医附一院病理科
第一步:固定
固定能防止组织自溶及腐败,尽量保持组织原貌
固定液通过以下机制稳定蛋白:
相互交联:甲醛与蛋白质交联
蛋白沉淀:蛋白变性沉淀
合理固定很重要,为了:
防止组织在处理中受损
经处理组织能易于切片
固定不当的后果
固定不当会导致手工及自动IHC及ISH检测结果出现片状或不正常染色,从而影响免疫组化检测结果判定
固定不全过程
交联过程发生较慢,很易逆转
若固定时间过短,会发生交联不全,组织将被下一步的乙醇固定
经乙醇沉淀的蛋白其抗原结构会改变,因而不适用于IHC及ISH检测
固定过度
固定时间过长可能导致假阴性检测结果
过度多聚化阻止了抗原暴露,因而影响抗原修复
影响固定的因素
组织类型
从标本手术切除至开始固定的时间
待检标本的体积及厚度
固定液类型(10%福尔马林)
固定液与组织体积比(至少10:1)
固定的时间
温度
从标本离体到开始固定的时间
为防止组织自溶,待检组织从手术离体至开始固定之间的时间应尽可能短
乳腺癌最多 1小时
胃癌应控制在 20–30 分钟内
固定液种类
推荐10%中性缓冲福尔马林(NBF)作为乳腺癌及胃癌组织的固定液(IHC或ISH)
10% NBF等同于4%甲醛溶液
交联简单的固定液
应使用新鲜福尔马林溶液,福尔马林贮备液应:
定期更换(最多贮存6个月)
室温贮存
标记生产日期或稀释浓度以及过期日期固定不当会导致手工及自动IHC及ISH检测结果出现片状或不正常染色,从而影响免疫组化检测结果判定
固定时间
乳腺组织
用于HER2检测的手术切除组织样本(IHC或ISH检测),一般固定6–48小时
胃组织
手术切除及活检组织样本,一般固定8–48小时
固定时间取决于待检组织类型--组织取样手段,组织厚度及固定液
不同的检测程序应使用优化的相应固定时间
第二步取材
,。太大太厚的组织块常会固定不充分,而影响脱水和制片。
第三步:脱水
目的:因为石蜡不溶于水,所以需从组织中除去水分
梯度脱水:75%,85%、95%,100%乙醇
若无乙醇,其他溶剂例如异丙醇亦可用于脱水