文档介绍：天津大学
硕士学位论文
流感病毒NS1蛋白对细胞生长调控及与Nucleolin相互作用的研
究
姓名:曾琳姣
申请学位级别:硕士
专业:食品科学
指导教师:黄金海;韩雪清
2011-12
摘要.、瓹靥澹菇薚、.际蹩寺×基因、:流感病毒;鞍祝徽婧吮泶铮幌赴芷冢坏蛲觯合嗷プ饔茫籒毒致病性和毒力,影响宿主细胞免疫反应及凋亡等多个方面具有重要作用。年流感蛋白氨基酸序列进行分析,鞍子个氨基酸,即结构域。其余位方法,检测鞍妆泶锪浚ü宰H臼约撂寤⒅柿V柿康扔化,获得高效转染细胞条件为:脂质体耍柿岭,瞬转缩,染色质边缘化等细胞凋亡现象。应用染色法检测细胞凋亡,实验/焕昧魇较赴羌觳庀赴芷冢⑾质笛樽橄赴芷诜⑸鶪疢果推测鞍啄芄煌ü系鱬、鞍妆泶铩⒋俳鴓磷酸化,使细胞周甲型流感病毒属于正黏病毒科,基因组由筛毫吹腞组成,其中第节段嗦敕墙峁沟鞍譔,该蛋白在受感染的宿主细胞中合成,在调控病本研究利用生物信息学分析软件对年甲型流感和蛋白相比较,在巳笔Я薘点共发生了个氨基酸变异。为进一步研究甲型流感病毒鞍锥哉婧讼赴淖饔茫狙芯客ü等諲真核表达载体。利用脂质体法将重组载体转染细胞,应用后,鞍椎谋泶锪看镒罡咧怠应用真核表达载体瞬时转染细胞,利用显微镜观察表达鞍椎腁赴翁赴鱿种逅酰寤湫。湓玻赴斯组阳性细胞数均高于空白和阴性对照组,且/难粜韵赴哂期阻滞,且//谟階期的细胞比例均大于/焕肳方法检测鞍锥韵赴芷诠丶鞍椎挠响,发现鞍卓缮系鱬、鞍椎谋泶铮蹦艽俳鴓蛋白位的磷酸化,且鞍锥哉庑┑鞍椎淖饔么笥蛋白。结合以上结期阻滞于/冢庇盏妓拗飨赴蛲觯作用强于赡与笔峁褂蛴泄亍应用缀痛炕际趸竦肨鞍子肫湎嗷プ饔玫鞍椎母春衔铮过检测嗷プ饔玫鞍譔,技术进一步验证了鞍子隢具有相互作用,且相互作用位点位于U为进一步研究鞍椎骺卣婧讼赴赴芷诩坝盏计涞蛲龅幕频於嘶蛋白
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第一章文献综述流感概述是一种传染性强、传播速度快的疾病。患者可表现为高热、咳嗽、头痛、乏力、咽喉和关节疼痛等,儿童可出现腹泻呕吐等症状。人们对流感的认识可以追溯到公元前辏@爸缴耙窖е浮毕波克拉底在其著作中描绘了一些类似于流感的症状,这是公认的对流感流行病学分离得到了禽流感病毒;年,美国人又砩砩戏掷氤龅谝恢曛砹鞲之间并无抗原交叉反应【。土鞲胁《灸芄桓腥靖髦侄锶缒窭唷⒅怼⒙恚以及人类。根据其表面的糖蛋白血凝素和神经氨酸酶的不同,将流行性感冒,简称流感橇鞲胁《疽鸬募毙院粑栏腥荆症状所作的最早描述。而在我国汉代,名医张仲景在其医学著作《伤寒杂病论》中提出了对流感症状的分析及中医治疗方法。直到世纪初,人们才真正发现流感的病因是流感病毒。年,英国人紫确掷氤隽巳死嗔鞲病毒【浚⒔涿狝型流感病毒。在此之前,年蚐毒株:疭///,即“古典型猪流感病毒”【俊旰年,和分别又发现了新的秃虲型流感病毒,且三种流感病毒土鞲胁《痉治狧从琋从的不同亚型。研究表明、、、、、、、、、芤鹑死啻范围死亡,能造成全球范围内的流感流行。除海豹和雪貂外,土鞲胁《炯负只能感染人类,但对人类致病性较低,可引起流感局部爆发。土鞲胁《镜谋异速率仅为偷プ笥遥也⑽奁渌切停捎谄洳≡缘牡ヒ唬苣言成大规模的流行。土鞲胁《灸芨腥救死唷⒐泛椭恚ú⒉怀<ǔV灰人类儿童不明显的或轻微的上呼吸道感染,很少造成流行。土鞲胁《敬拘郧俊⒅虏⌒愿撸诮年的时间内引起了多次世界范围内的流感大流行。年始发于美国的“西班牙流感由亚型引起,全球约%.%的人感染,万人死于此病,远远大于一战死亡人数。年亚型引发的亚洲流感,造成万人死亡,同年律鲆呙纭晗愀哿鞲,由引起,同年年底传播到美国,引起约蛉怂劳觥甓砉鞲,亚型病毒为年流感病毒的变异体,主要感染年后”,
的酸性条件下,一部分融断与内涵体膜相连的病毒包膜,《《镜母粗亚州、得克萨斯州爆发甲型流感,<贑型流感病毒,其长度可达病毒缺少第鼋诙危个节段组成。流感病毒的外层包膜是一层来源于宿主细胞细胞膜的磷脂双层,,为糖型的是哺乳动物的肺和鼻腔的上皮细胞与鸟类的肠上皮细胞。流感病毒的复制是一个多步骤过程,首先病毒与细胞结合并进入细胞内部,接着释放其基因组,利出生的青少年。年,香港首先发生“禽流感”,随后病毒发生变异,由鸡传染给人,共确诊例感染,死亡辏鞲绾兔拦永D现甲型流感感染病例,死亡病例达流感病毒属于正黏病毒科,病毒颗粒多成球形,其直蛘吒ぶ潦擅祝茉诒桓腥鞠赴砻嫘纬伤看峁埂>」芰鞲胁《颗粒的形态有所差异,但其结构却基本相同,都是由核心和外层包膜构成的。核心由负链纬傻幕蜃椤⒓鞍捅;的蛋白质构成,每节含了一个