文档介绍：人钙离子通道抗体( )酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供体外研究使用! 预期应用 ELISA 法定量测定人血清、血浆、组织匀浆或其它相关生物液体中 含量。实验原理用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗 抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗 抗体、 HRP 标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物 TMB 显色。 TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度( OD 值),计算样品浓度。试剂盒组成及试剂配制 1. 酶联板:一块( 96 孔) 2. 标准品(冻干品): 2 瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至 1ml ,盖好后静置 10 分钟以上,然后反复颠倒/ 搓动以助溶解,其浓度为 10 ng/ml ,做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释)后,分别稀释成 10 ng/ml , 5 ng/ml , ng/ml , ng/ml , ng/ml , ng/ml , ng/ml ,样品稀释液直接作为标准浓度 0 ng/ml ,临用前 15 分钟内配制。如配制 5 ng/ml 标准品:取 (不要少于 ) 10 ng/ml 的上述标准品加入含有 样品稀释液的 Eppendorf 管中,混匀即可,其余浓度以此类推。 3. 样品稀释液: 1 × 20ml 。 4. 检测稀释液 A : 1 × 10ml 。 5. 检测稀释液 B : 1 × 10ml 。 6. 检测溶液 A : 1 × 120 μ l ( 1:100 )临用前以检测稀释液 A 1:100 稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制( 100 μ l/ 孔),实际配制时应多配制 - 。如 10 μ l 检测溶液 A 加 990 μ l 检测稀释液 A 的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。 7. 检测溶液 B : 1 × 120 μ l/ 瓶( 1:100 )临用前以检测稀释液 B 1:100 稀释。稀释方法同检测溶液 A 。 8. 底物溶液: 1 × 10ml/ 瓶。 9. 浓洗涤液: 1 × 30ml/ 瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释 25 倍。 10. 终止液: 1 × 10ml/ 瓶( 2N H2SO4 )。 11. 覆膜: 5 张 12. 使用说明书: 1 份自备物品 1. 酶标仪(建议参考仪器使用说明提前预热) 2. 微量加液器及吸头, EP 管 3. 蒸馏水或去离子水,全新滤纸标本的采集及保存 1. 血清:全血标本请于室温放置 2 小时或 4 ℃过夜后于 1000 x g 离心 20 分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20 ℃或-80 ℃保存,但应避免反复冻融。 2. 血浆:可用 EDTA 或肝素作为抗凝剂,标本采集后 30 分钟内于 2 - 8 ° C 1000 x g 离心 15 分钟,或将标本放于-20 ℃或-80 ℃保存,但应避免反复冻融。 3. 组织匀浆:将动物的组织标本先用 PBS 洗涤,去除多余血液,匀浆化后放在 20ml PBS 中于-20 ℃放置过夜,第二天,经过二次反复冻融破膜,将匀浆物 5000x g 离心 5 分钟,取上清即可