文档介绍：西南大学
硕士学位论文
栽培南方红豆杉紫杉醇分析提取与指纹图谱研究
姓名:杨宪
申请学位级别:硕士
专业:森林培育
指导教师:杨水平
20090501
~甿段冢硕士研究生杨宪指导老师杨水平副教授长江流域、南岭山脉山区及河南、陕西、甘肃、台湾等省的山区或溪谷,它是亚热带常绿阔杉烷系列化合物,而这些成分会严重干扰紫杉醇的反相高效液相色谱法瓾测定。为了能准确测定紫杉醇含量,,即:用杉人工林材样品制备优化处理如下:将采集的南方红豆杉整株样品干燥,用读疺乙醇浸提两次,合并提取液,减压浓缩至干;再用读的二氯甲烷液液萃取三次,合并萃取液,减压浓缩至干,残渣加色谱甲醇溶解,制成南方红豆杉样品溶液;,又称美丽红豆杉,为裸子植物红豆杉科红豆杉属参铩N:於股际糁参镏蟹植甲罟惴旱囊恢郑饕7植加叶林、常绿落叶阔叶混交林的特征种,常与其他阔叶树、竹类以及针叶树混生,分布于海拔米,资源储量相对较红豆杉其它各种多。自年从红豆杉中分离出紫杉醇后,它已成为研究抗肿瘤天然药物的重点,南方红豆杉更成为我国紫杉醇药物生产的主要树种。南方红豆杉中紫杉醇含量甚微,其含量范围仅仅在%%之间,含有大量的植物腊、色素和树胶等杂质,特别是其中共存许多分子结构和理化性质与紫杉醇极其相近的紫字,患状水一乙腈:.为流动相,紫线性方程为:幌喙叵凳齬时,与峰面积线性关系良好;∨ǘ纫卜螴心一的检测要求。对南方红豆方法考察了该方法的可行性。同时随机采集了批南方红豆杉药材样品,进一步验证了建立的觳庾仙即己糠椒ǖ目尚行裕峁砻鞲梅椒ǹ焖佟⒓虮恪⒖煽浚叵中院茫作为人工种植南方红豆杉中紫杉醇含量检测方法。在对重庆市忠县的南方红豆杉人工林材各部位紫杉醇含量变化规律研究过程中,以紫杉!
曼曼量曼曼曼蔓曼曼曼衤蔓曼曼曼曼鼍曼葛曼曼曼曼曼曼曼曼曼曼曼皇曼驶蔓曼蔓曼曼寐示寺炕年龄、季节运婊∪「骷窘诘囊桓鲈路葑魑4、不同部位蛩亟辛擞叛∈匝椤=醇的含量影响也是显著的;通过多重比较,确定效果最好,即在路菔辈捎晟斯ぶ种材戏胶於股家叮S呕〕龅淖仙即甲罴巡杉被俳岷虾於股忌导燥指稍锓椒ǎ酆细鞲稍锓椒ㄖ械牟煌稍锾跫匝榻峁砻鳎杭跹垢稍镆搜∮优化并建立红豆杉枝叶中紫杉醇的提取工艺,充分考虑了工业化生产的可行性。以使用提取次数、提取时间蛩亟杏叛∈匝椤=峁砻鳎捍雍於股贾刑崛∽仙即嫉淖钪饕S跋即采用读%乙醇提取危看翁崛小时,或采用读疺ヒ在中药的开发过程中,色谱指纹图谱研究工作是国内中药现代化研究的热点之一,为中药材建立相应的指纹图谱是现阶段控制中药内在质量的有效手段。试验中共收集到人工种植南方红豆杉枝叶药材批、研究过程中考察了色谱条件的优化,包括色谱柱、检测波长和流动相的优化选择;同时参照国家食品药品监督管理局对中药材指纹图谱的要求,对色谱条件进行了方法学验证,即仪器精密度试验、样品重复性和稳定性试验;在此基础上构建了色谱指纹图谱,包括:共有峰的标定、参照峰的选择、共有峰相对保留时间及积分相对比值的确根据色谱条件的优化结果,对仪器精密度、样品重复性和稳定性进行试验,高效液相色色谱法进行色谱指纹图谱的研究是切实可行。通过色谱指纹图谱的构建,确定了个共有峰,以欧遄魑2握辗澹还灿蟹逑喽员A羰奔浜拖喽苑迕婊钠骄鵕都小于%,说明试验结果可靠;共有峰面积百分比在%~ィ现肝破籽芯抗娑ㄐ∮サ募觳庖G螅醇含量为指标,采用正交试验,通过蛩水平交表阅戏胶於股加跋煲蛩果表明:南方红豆杉中紫杉醇含量主要影响因素是年龄,其次是不同部位,采收季节对紫杉情况,采集晟闹σ蹲魑W仙即嫉氖匝槎韵蟆干燥方法对南方红豆杉中紫杉醇含量的影响研究中,采用自然风干、减压干燥和微波干微波干燥低火;而自然风干和其它干燥方法可能造成紫杉醇显著降解,均不宜取。.测定的紫杉醇含量为指标,采用正交试验法对提取过程中乙醇浓度、乙醇用量、因素是乙醇浓度及乙醇用量,高浓度、适当多的用量有利于提取;提取时间和次数也极为重要;单因素效果分别以每次提取和共提取挝W罴选W钪誘蚑醇提取危崛小时,均为优化选出的紫杉醇最佳提取工艺条件。定、非共有峰占总峰面积的百分比、共有峰的相似度计算,色谱条件的优化结果表明,选用柱,检测波长为砸译婧退A鞫嘟刑荻认赐眩W罴焉滋跫谱测定结果中,共有峰相对保留时间和相对峰面积的夹∮.ィ砻鞑捎酶咝б合两商大学硕士学位论文
采用相关系数法和夹角余弦法对共有峰的相似度进行了计算,两种计算方法结果全图谱相似度均芝%,表明所建立指纹图谱的技术指标稳定。选定的指纹图谱可对人工种植南方红豆杉枝叶药材组分群体特征的一致性作出可靠的判断。关键词:南方红豆杉;紫杉醇