文档介绍：沉降菌测试方法
1、 把巾90mmK 15mm硼硅酸玻璃培养皿包在报纸里，放入恒温烤箱中加热 至180C后，干烤2小时。
2、 取X克培养基放入X克蒸馏水，放入高压消毒锅中加热溶化，冷至45C 时，在无菌操作要求下将培养基注入培养皿，每皿约 15ml。
3、 待琼脂凝固后，将培养基平皿倒置于 33C恒温培养箱中培养48小时， 若培养基平皿上确无菌落生长，即可采样用。制备好培养皿宜在 2—8C环境中 保存。
4、 采样时，一般在 100 级层流罩中放置 3 个培养皿，在 100000 级， 10000 级按面积大小一般放 2 个培养皿。打开培养皿盖，使培养基表面暴露 小时， 再将培养皿盖上后倒置于恒温培养箱 33C培养，时间不小于48小时，采样点位 置离地 — 左右。
5、 将培养皿举起用肉眼直接计数，用记号笔点记然后用 5—10 倍放大镜检 查是否遗漏，若培养皿上有 2 个或 2 个以上菌落重叠，分辨时仍以 2 个或 2 个 以上菌落计数，不要漏计培养皿边缘生长菌落，并注意细菌菌落与培养基沉淀 物区别。
6、 沉降菌测试前， 被测洁净室已消毒。 被测洁净室温湿度须达到规定要求， 静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内，测试状态有静态和动态两 种，测试状态选择须符合生产要求，并在报告中注明测试状态。
7、 测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别工作服，静态测试时，室内测试 人员不得多于 2 人。测试时间对单向流 100 级净化房间及层流工作台，测试应 在净化空调系统正常运行不少于 10min 后开始，对非单向流， 100000 级以上净
化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于 30min后开始。
8 平均菌落数计算：M+M+M
平均菌落数二Ml M 2 Mn
n
n—培养皿总数
Mi — 1号培养皿菌落数
M2—2号培养皿菌落数
Mn—n号培养皿菌落数
用平均菌落数判断洁净空气中微生物。洁净室内平均菌落数必须低于所选
定的评定标准，（100级w 1个；10000级w 3个；100000级w 10个）。若某洁净 室内平均菌落数超过标准，则必须对此区域先进行消毒，然后重新采样两次， 测试结果均须合格。
人员进出洁净生产区的一般程序：
人员进出无菌操作洁净生产区程序:
无菌医疗器具洁净室环境要求及监测：
监测项目
技术指标
监测方法
监测频次
100 级 10000 级 100000 级
300000 级
温度（C）
18C— 28 C
1 次 /班
相对湿度 %
45~65
1 次 /班
水平层流
风速 m/s
> —— ——
JC
垂直层流
1 次 /月
>
换气次数
—— > 20 > 15
> 12
1
次/月
静压差 Pa
不同级别洁净室及洁净室与非洁净室之间》
5
洁净室与室外大气》10
1
次/月
沉降菌数
< 1 < 3 < 10
< 15
GB/T16294-1996 1
次/周
无菌检查法试验步骤
无菌检查在洁净度 100 级单向流空气区域内进行，其全过程应严格遵守无 菌操作，防止微生物污染。
1、器具灭菌：培养皿若干个（报纸所好） 、试管、剪刀、镊子等装入盒中 置电热干燥箱内180C, 2小时。
2、 硫乙醇酸盐流体培养基（细菌） ，根据试验实际用量取若干培养基和蒸 馏水，煮沸，摇匀，分装至适宜的容器中，瓶塞封口，灭菌。硫乙醇酸盐流体
培养基置33C培养48小时，应无菌生长。
改良马丁培养基 （真菌），根据试验实际用量取若干培养基和蒸馏水， 煮沸，
摇匀，分装，灭菌。改良马丁培养基置 24C培养72小时，应无菌生长。
营养琼脂根据实际用量按一皿装15ml，分装几个皿来计算，灭菌。
%***化钠分装至 7 支试管，封口，灭菌。
3、 把金黄色葡萄球菌用接种环刮一下，放入 %***化钠试管中摇匀，作
10倍系列稀释至10-7，然后从10-5、10-6、10-7试管各抽取1ml，分别放入标号5#、 6#、 7#培养皿里，倒入营养琼脂摇匀， （营养琼脂不能太烫，以不烫手为准）待 营养琼脂冷却后倒置放入33C培养箱中培养48小时，48小时中取出观察计数， 根据菌落数小于 100cfu 来决定用几号。
4、 操作时，应用适当的消毒液对供试品表面或外包装擦拭消毒后，以无菌 方法取内容物。取供试品 3 只接种于足以浸没供试品的适量培养基中。一只瓣 膜接种于硫乙醇酸盐流体培养基中，轻轻摇动，使瓣膜与培养基混合， 1 支试管 接种金黄色葡萄球菌对照用菌