文档介绍：第一军医大学
博士学位论文
噬菌体抗体库的构建及筛选大肠癌相关抗原抗体的研究
姓名:南清振
申请学位级别:博士
专业:内科学(消化专业)
指导教师:张振书;杨希山
20040520
缩略词表英文全称英文缩写中文译名氨苄青霉素碱基对牛血清白蛋白大肠癌双蒸水四种脱氧核甘三磷酸溴化乙啶乙二胺四乙酸小时卡那霉素分钟吗啉代撬光密度聚合酶链反应聚乙二醇噬斑形成单位每分钟转速逆转录十二烷基硫酸钠秒四环素三羟甲基氨基甲烷
主要名词解释噬菌体表面呈现技术基因芯片技术噬菌体抗体库抗体重链可变区:一种将外源肽或蛋白质与特定噬菌体外壳蛋白騪Ⅷ诤喜⒊氏钟谑删灞砻妫菇ǖ鞍字或多肽文库,从中筛选相应的蛋白质、多肽或抗体的基因工程技术。由等于年首次报道。菏墙昀捶⒄蛊鹄吹囊幌应用杂交原理进行分子分析的新技术。其原理是通过微量点样技术等方法,把大量基因的与载体玻片结合,提取待测组织的,通过反转录过程获得其经荧光标记作为探针与载体玻片进行杂交,杂交信号通过基因芯片扫描仪收集,由特定的分析软件进行分析,从而对基因序列及其功能进行大规模高通量的研究。:是利用噬菌体表面呈现技术,将全套抗体可变区基因重组到表达载体中,并在噬菌体表面表达的段或单链抗体文库。瑅:为免疫球蛋白重链多肽链近氨基端或区域,其氨基酸序列随抗体特异性不同而变化。抗体轻链可变区琕:为免疫球蛋白轻链多肽链近氨基端区域,其氨基酸序列随抗体特异性不同而变化。抗体可变区,褐缚固迩帷⒅亓吹可变区,是保留全部抗原结合表位的最小抗体片段。抗体恒定区。:与可变区肽链的氨基末端不同,为抗体分子不变的羧基末端。慰固澹喊ㄖ亓吹目杀淝⒌谝缓愣ㄇ屯暾那崃矗,
抗原决定簇酶联免疫吸附试验河妹敢坏孜锓从醇觳饪乖蚩固宓姆椒āM者通过链间二硫键连接,是完整抗体的,具有与抗体相近的抗原结合特性,穿透性强,抗原性弱。:抗原分子或颗粒表面决定该抗原特异性的特殊化学基团称抗原决定簇或表位常酶被偶联到抗体上,既保留了偶联物的酶学活性,又保留其免疫学活性。酶偶联物的量由其合适活性底物的颜色变化所决定,所用的酶产生易测定的有色或荧光产物。
噬菌体抗体库的构建及筛选大肠癌相关抗原抗体的研究中文摘要背景、目的和意义大肠癌,是严重威胁人类生命健康的常见恶性肿瘤之一。由于大肠癌的发生发展是一种多基因、多因素、多步骤的复杂过程,目前尚未发现其相当特异的分子病理改变和肿瘤标志物,在其早期诊治研究中普遍面临的问题是缺乏特异、准确、简便的生物学指标和实用方法。自年代初噬菌体抗体库技术出现以来,该技术使得人们从应用刈榧际醺脑煜钟械牡タ狗⒄沟嚼没蚬こ碳际克隆新的抗体分子。在感染性疾病的诊治、自身免疫性疾病与病毒性疾病的鉴别、肿瘤的影像分析和导向治疗或基因治疗,抗原表位分析以指导疫苗分子的设计、新型药物设计、蛋白分子免疫识别机制的研究等多个领域显示出巨大的潜能和广阔的应用前景。作为功能性小分子抗体片段,ㄖ亓碫狢段屯暾那崃矗秸咄ü桓隽醇涠蚣樱峭暾固宓娜种弧哂杏肟固逑嘟目乖岷匣钚裕蚱浞肿恿啃⒋┩感郧俊⒖乖缘停可在原核系统表达以及易于基因工程操作等优点而受到人们的重视。目前所知的与大肠癌相关的抗体不仅有限,而且特异性不高。寻找高特异性、高亲和性的大肠癌抗体已成为学者们所关注的热点之一。随着分子生物学的发展,基因芯片技术的运用,为寻找到大肠癌较特异性的抗原提供了可能。本课题采用噬菌体抗体库及基因芯片等前沿生物学技术,以大肠癌患者外周血淋巴细胞为材料,构建人大肠癌自然致敏抗体问删宄氏挚狻4踊因芯片筛选出来的通过初步验证与大肠癌特异性相关的基因蛋白抗原,大肠癌组织混合抗原以及乖魑9滔嗫乖邮删蹇固蹇庵猩秆⒏患勾
材料与方法离纯化,与分别以适量肠癌相关抗体,为大肠癌的特异性诊断和免疫治疗提供新的手段,并为进一步利用这些抗体筛选大肠癌相关基因并研究其功能提供库源。一、噬菌体抗体库的构建—┰隹固錕、崃春椭亓碏位蚱危悍掷氪蟪Π┗颊叩外周血淋巴细胞并提取其总D孀B己铣蒫谝涣矗嘤σ锱涠越┰隹固錕、崃春椭亓碏位蚱巍固錕、崃碢产物重组入噬粒载体:轻链锞疿,双酶切后进行连接。纯化的连接产物转化感受态籦赴┰龊筇崛∈闪#吹玫角崃椿蚩馐闪!R允量穕,穕,转化细菌菌液铺板,以测定转化率。挑取单克隆,提质粒后双酶切鉴定重组效率。删蹇固錐呈现库的构建:同样的方法把重链段基因克隆到轻链基因库噬粒中得到噬菌体抗体全基因库抗体基因库O蛏鲜固寤蚩庵屑尤敫ㄊ删錠腥竞笾票赋蒄噬菌体呈现原始库。测定其库容量及进行初步鉴定。二、基因芯片筛查大肠癌相关基因崛例大肠癌患者手术切除的大肠癌及其正常大肠粘膜组织标本的总鲜鲎躌进行反转录,同时用疌标记反应产物。昙呛玫牟镉牖蛐酒性咏环从Α>韬褪荽砗螅到大肠癌基因表达情况。粞∮氪蟪Π┳钕喙氐幕蚪蠷狿验证。结果好的基因。基因郝蚨杂Φ鞍卓乖蛋白抗原
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