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人源尘肺病噬菌体单链抗体库的构建和初步鉴定摘要研究背景尘肺病目前仍是中国职业病中发病率最高、死亡危险性较大、对劳动者危害最严重的一类,迄今尚无将其消除或逆转的根治方法,只能根据病情进行综合医治以减轻症状、延缓病情进展,因此,积极预防并尽早诊断对于增进病人生存质量及延长寿命尤为重要。迄今为止,国内外已经对尘肺病进行了大量的相关研究,但尘肺病的形成机制目前还不十分清楚,不仅尘肺病所致肺组织纤维化尚无消除或逆转的根治方法,也缺乏接尘人群健康监护、早期预警及尘肺病早期发现的有效生物监测指标,诊断仍然依靠达到一定病理程度后的弑硐帧进一步探索尘肺病的发生、发展和演进过程,筛选和鉴定出能够反映粉尘接触、尘肺病进程的生物标志,对解释尘肺病发病分子机制、进行尘肺发病的早期预警和诊断以及研究阻止纤维化进展的干预靶点,都具有积极的意义和作用。目的利用噬菌体抗体库技术,构建人源尘肺病噬菌体单链抗体库,为尘肺病生物标记筛选打下基础。方法首先分离尘肺病人外周血淋巴细胞,提取总醋B己铣傻谝涣碿采用兼并引物利用半巢式┰隹固逯亓颓崃纯杀鋢颉J褂带有粘端的将和连接成单链抗体基因。将和噬菌粒载体兴盖泻螅玈衅唇樱;粮惺芴蟪Ω司鶷,经辅助噬菌体超感染,
构建了全人源尘肺噬菌体单链抗体库,对抗体库的库容量与多样性进行检测。结果结果显示:琼脂糖电泳从尘肺病人外周血中提取的总杉飨缘醮崾咀躌无降解且完整性较好;片段大小为笥遥片段为笥遥樽昂骃蚱—ざ任左右。涂板后隔夜培养,初步估算抗体库库容量为×氖删宓チ纯固蹇狻随机挑取龅タ寺。柿K盖泻笙允狙粜圆迦肼%/。结论:成功构建了库容为的全人源尘肺病噬菌体单链抗体库,抗体库多样性良好。关健词:尘肺噬菌体抗体库单链抗体摘要和Ⅱ
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摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯.⋯⋯⋯..目录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯.⋯⋯..刖舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯.⋯⋯..材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.:⋯⋯⋯⋯⋯⋯..笛椴牧虾鸵瞧魃璞福笛榉椒ā技术路线⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯淋巴细胞总某樘帷目录标本采集⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..菌株与载体⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯主要试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..主要仪器设备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.引物和连接肽的设计⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯连接肽的合成和酶促磷酸化粘端⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..主要溶液配制⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.重链和轻链顳片段凝胶回收⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..纬伤碊⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..碙姿峄的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..躌的提取步骤如下⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.法提取总细胞逆转录狿┰⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯...蚶┰。与连接肽连接⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..亓碫隫连接⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..蚅.
结果与分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯痉尾∪送庵苎猂的提取⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..チ纯固錝虻淖樽坝肜┰觥甋虻拿盖小ⅲ印⒆;屯炀取粜灾刈榭寺≈柿5乃盖屑╛⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯固蹇饪馊萘康募ā讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..综帧参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..⋯⋯致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.⋯⋯..:甊┰隹固迩崃础⒅亓椿蚱巍制备载体质粒单链抗体基因库与噬菌粒载体拼接⋯⋯⋯..制备感受态大肠杆菌ㄖ删宓闹票浮删宓