文档介绍：小鼠p53(p53/TP53)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书产品编号:E-EL-M0877 (本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!) 声明: 尊敬的客户,感谢您选用本公司的产品。本产品选用世界著名生产厂家的原料,采用专业ELISA kit生产技术制造。适用于体外定量检测小鼠血清、血浆、组织匀浆或细胞培养上清液中天然和重组p53/TP53 浓度。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分!如有疑问,请及时联系伊莱瑞特生物科技有限公司。试剂盒组成: 名称-中文名称-英文规格保存条件 ELISA酶标板 Micro ELISA Plate 8×12 / 8×6* 4℃冻干标准品 Reference Standard 2/ 1支* 4℃标准品&样品稀释液 Reference Standard & Sample Diluent 1瓶20mL/12mL* 4℃浓缩生物素化抗体 Concentrated Biotinylated Detection Ab 1支120μL/70μL* 4℃生物素化抗体稀释液 Diluent for Biotinylated Detection Ab 1瓶10mL/6mL* 4℃浓缩HRP酶结合物 Concentrated HRP Conjugate 1支120μL/70μL* 4℃(避光) 酶结合物稀释液 Diluent for HRP Conjugate 1瓶10mL/6mL* 4℃浓缩洗涤液(25×) Concentrated Wash Buffer (25×) 1瓶30mL/16mL* 4℃底物溶液(TMB) Substrate Reagent 1瓶10mL/6mL* 4℃(避光) 反应终止液 Stop Solution 1瓶10mL/6mL* 4℃封板覆膜 Plate Sealer 5/3张* 产品说明书 Product Description 1份*: [96T/48T](打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整) 检测原理: 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗小鼠p53/TP53抗体包被于酶标板上,实验时标本或标准品中的p53/TP53会与包被抗体结合,游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗小鼠p53/TP53 抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗小鼠p53/TP53抗体与结合在包被抗体上的小鼠p53/TP53 结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB), TMB在辣根过氧化物酶的催化下现蓝色,加终止液后变黄。用酶标仪在450nm波长处测OD值, p53/TP53浓度与OD 450值之间呈正比,通过绘制标准曲线求出标本中p53/TP53的浓度。标本收集: 1. 血清:全血标本于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟,取上清即可检测,收集血液的试管应为一次性的无热原,无内***试管。 2. 血浆:,标本采集后30分钟内于1000×g离心15分钟,取上清即可检测。避免使用溶血,高血脂标本。 3. 组织匀浆:用预冷的PBS(, pH=)冲洗组织,以去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样本对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10 分钟,取上清检测。 4. 细胞培养上清:取细胞培养上清于1000×g离心20分钟,除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5. 其它生物标本:1000×g离心20分钟,取上清即可检测(具体处理方法可参考:?tid=477) 6. 标本应清澈透明,悬浮物应离心去除。 7. 标本收集后若不及时检测,请按一次使用量分装,冻存于-20℃/-80℃冰箱内,避免反复冻融, 1-6月内检测,4℃保存的应在1周内进行检测。 8. 如果您的样本中检测物浓度高于标准品最高值,请根据实际情况,做适当倍数稀释(建议先做预实验,以确定稀释倍数)。试验所需自备物品: 1. 酶标仪(450nm波长滤光片) 2. 高精度移液器,EP管及一次性吸头:-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 3. 37℃恒温箱, 双蒸水或去离子水 4. 吸水纸检测前准备工作: 1. 请提前20分钟从冰箱中取出试剂盒,平衡至室温。 2. 将浓缩洗涤液用双蒸水稀释(1:25)。未用完的放回4℃。从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶,属于正常现象,可用40℃水浴微加热使结晶完全