文档介绍：实验二细菌的革兰氏染色及芽孢染色法
一、实验目的：
1. 学****并掌握革兰氏染色法和芽孢染色法。
2. 巩固显微镜油镜的使用技术。
3. 巩固无菌操作技术
二、实验原理：
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。革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G—）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法。
二、实验原理：
主要因为两类细菌细胞壁结构和成分不同。
G+菌细胞壁：肽聚糖含量高（90％）、交联程度高、肽聚糖层厚、脂类含量少→用乙醇不易脱色；
G-菌细胞壁：肽聚糖含量低（10％）、交联程度低，肽聚糖层薄、外壁层脂类含量较高→用乙醇易脱色。
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二、实验原理：
芽孢是某些G+菌形成的圆形或椭圆形的休眠体，抗热性和折光性较强。
芽孢的大小、形态、位置可做分类依据。
二、实验原理：
中央芽孢
末端芽孢
偏端芽孢
游离芽孢
二、实验原理：
芽孢壁厚、透性低，着色和脱色均较困难；
但当用弱碱性染料（孔雀绿）在加热的情况下进行染色时，染料可进入菌体和芽孢；
进入菌体的染料经水洗后可被脱色；
当用对比度大、浅色的复染色剂（番红）染色后，芽孢仍保留初染剂的颜色（绿色），而菌体呈复染剂颜色（红色）。
三、实验器材
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革兰氏染色：培养12h-16 h枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）或者金黄色葡萄球菌（ Staphyloccocus aureus ）和培养24 h大肠杆菌（Escherichia coli）
芽孢染色：培养36 h 的巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium ）或者枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）
2. 染色液和试剂：
革兰氏染色染色液：结晶紫、卢戈氏碘液、95%酒精、番红复染液；
芽孢染色液：5%孔雀绿水溶液、%番红水溶液；
二甲苯、香柏油。
3. 器材：
载玻片、接种环、试管夹、酒精灯、擦镜纸、显微镜。
三、实验器材
四、实验步骤
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（1）涂片：涂片方法与简单染色涂片相同。
（2）干燥：与简单染色法相同。
（3）固定，与简单染色法相同。
（4）初染：加适量结晶紫染色液染色1-2min，水洗。
（5）媒染：滴加卢戈氏碘液，媒染1min，水洗。